[发明专利]一种重组人白介素12蛋白的纯化方法

权利要求书

1.一种重组人白介素12蛋白的纯化方法，其包括以下步骤：

对含有重组人白介素12蛋白的细胞培养液进行澄清过滤预处理；

将预处理后获得的细胞液进行复合型强阴离子交换层析，收获的蛋白样品进行复合型弱阳离子交换层析，进一步收获的蛋白样品进行强阳离子交换层析，最终收获得到纯化后的重组人白介素12蛋白；

其中，所述复合型强阴离子交换层析所采用的介质填料的基质为高流速琼脂糖，功能基团为N-苄基-N-甲基乙醇胺；所述复合型弱阳离子交换层析所采用的介质填料的基质为高流速琼脂糖，功能基团为苯甲酰蛋氨酸；所述强阳离子交换层析所采用的介质填料的基质为高流速琼脂糖，功能基团为丙基磺酸盐。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其中，对含有重组人白介素12蛋白的细胞培养液进行澄清过滤预处理的方法包括：

采用含有较大孔径和较小孔径的多层纤维素滤膜串联而成的两级深层过滤系统对细胞培养液进行澄清过滤；

优选地，较大孔径的纤维素滤膜的孔径为0.5～10μm；较小孔径的纤维素滤膜的孔径小于0.5μm。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其中，进行所述复合型强阴离子交换层析的介质填料的柱高为10±1cm；

优选地，所述复合型强阴离子交换层析所采用的介质填料包括Capto adhere、Captoadhere ImpRes或它们的替代填料。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其中，进行所述复合型弱阳离子交换层析的介质填料的柱高为15±1cm；

优选地，所述复合型弱阳离子交换层析所采用的介质填料包括Capto MMC、Capto MMCImpRes或它们的替代填料。

5.根据权利要求1所述的纯化方法，其中，进行所述强阳离子交换层析的介质填料的柱高为10±1cm；

优选地，所述强阳离子交换层析所采用的介质填料包括Capto S、Capto S ImpAct、Capto SPImpRes或它们的替代填料。

6.根据权利要求1所述的纯化方法，其中，在进行复合型强阴离子交换层析后，对收获的蛋白样品调整其pH值为6.5～7.0，并调整其电导率至10～16mS/cm。

7.根据权利要求1所述的纯化方法，其中，在进行复合型弱阳离子交换层析后，对收获的蛋白样品调整其pH值为7.5～8.5，并调整其电导率至5.0～10mS/cm。

8.根据权利要求1或3所述的纯化方法，其中，采用复合型强阴离子交换层析的方法为：

采用平衡液平衡层析柱至基线，上样结束后采用0～100％洗脱液进行梯度洗脱，优选地，所述梯度洗脱具体为：

10％～30％洗脱液，优选15％～20％洗脱液，洗脱2～20个柱体积，流速为150～300cm/h，洗脱杂蛋白；

60％～80％洗脱液，优选70％～75％洗脱液，洗脱2～10个柱体积，流速为150～300cm/h；UV₂₈₀≧50～250mAU时，洗脱目的蛋白，收集洗脱峰；

优选地，所述平衡液为10～50mmol/L的Tris-HCl缓冲液，pH值为7.0～8.5；所述洗脱液为含有10～50mmol/L的Tris-HCl缓冲液和1mol/L的NaCl的混合液，pH值为7.0～8.5。