[发明专利]一种鸡PEBP1基因多克隆抗体、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种鸡PEBP1基因多克隆抗体、制备方法及应用，属于生物技术领域。所述制备方法包括以PEBP1重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔，获取多克隆抗体的步骤。通过该方法可以制备高质量的多克隆抗体，并且该多克隆抗体可用于动物机体中PEBP1蛋白的检测，具有应用范围广、特异性强、操作简便和费用较低等多方面优点，还为多种肉鸡疾病病理机制的研究和诊断奠定了材料基础和技术支持。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及一种鸡PEBP1基因多克隆抗体、制备方法及应用，特别涉及一种与肉鸡肺动脉高压和腹水类疾病发生发展相关的鸡PEBP1基因多克隆抗体、制备方法及应用。

背景技术

肉鸡腹水综合征(ascites syndrome，AS)曾叫做禽类水肿、充血性心衰和肺动脉高压综合征等，是一种比较常见的代谢紊乱、非传染性疾病。该病最早发现于高海拔、寒冷的地区，其主要特征是心脏负荷增强、低氧血症、右心肥大等，病理剖检后可见腹腔中积聚大量淡黄色透明液体、心包积液、肾脏和肝脏充血肿大乃至坏死。研究表明，此类疾病主要发生于2-6周龄且体型较大的肉鸡，并由营养、疾病、环境及饲养管理等多种因素共同作用导致。这是因为在肉鸡生长的关键时期，肉仔鸡的心肺发育尚未成熟，使其扩张受到限制，但生长速率过快会导致机体耗氧量达到心肺供氧的临界点，当血流量增加时，受到肺脏的限制，其毛细血管过度充盈，肺血管阻力增强，进而导致肺动脉高压形成腹水。此外，这类肺动脉高压和腹水类疾病的发生会给养禽业带来重大的经济损失，该病一年四季皆可发生，寒冷的冬春季节较为多见，且病程较短，一般5-7天死亡，死亡率高达15％-30％。近年来，该病在肉鸡饲养过程中经常发生，甚至会对全球养禽业的经济效益造成严重损害。

磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(PEBP1)，又称为Raf激酶抑制剂蛋白(RKIP)，是一种具有高度保守性且与其他蛋白家族没有显著同源性的特殊调控因子。它广泛存在于机体的多个组织或器官中，参与调节机体的各种生理活动。研究表明，PEBP1的表达与损伤细胞的侵袭以及血管形成程负相关。PEBP1本身可以与Raf-1相结合，并起到抑制Raf-1下游信号通路的作用，进而削弱损伤细胞的增殖扩散，降低动脉血管的过度形变和异常增生。防止因血管内皮细胞的损伤造成动脉血管的极度扩张和扭曲，进而降低肺动脉高压和腹水类疾病的发生发展。此外，当机体处于一系列病理条件下时，PEBP1的磷酸化会抑制PEBP1与Raf-1之间的相互作用，反而和磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C(PC-PLC)发生相互结合，从而正向调控其活性。而PC-PLC参与了血管内皮细胞凋亡的信号通路，引起血管内皮细胞功能障碍，导致血管壁对细胞因子和脂质的渗透性增强，动脉压强和阻力增大，加剧了动脉壁内皮细胞的损伤，最终导致腹水综合征的形成。综上可知，PEBP1与肉鸡肺动脉高压和腹水类疾病存在着密切的联系。

同时，发明人在前期肉鸡腹水综合征的肺动脉组织转录组测序试验结果中发现PEBP1基因水平呈显著低表达。可见，PEBP1基因可以成为肉鸡腹水综合征疾病中检测及治疗靶点的潜在指标。目前对鸡的PEBP1基因相关抗体的研究还是空白。因此，通过制备PEBP1基因多克隆抗体，将为肉鸡腹水综合征疾病等相关疾病的检测及治疗的研究提供了条件。

发明内容

本发明的目的是提供一种鸡PEBP1基因多克隆抗体、制备方法及应用，以解决上述现有技术存在的问题，该多克隆抗体的制备简便，成本低，灵敏度高，作用范围广，为后期PEBP1蛋白的检测和腹水类疾病病理机制的研究提供了数据支持。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供了一种鸡PEBP1基因多克隆抗体的制备方法，包括以PEBP1重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔，获取多克隆抗体的步骤。

优选的是，所述PEBP1重组蛋白的制备包括以下步骤：

步骤1：获取鸡源PEBP1基因的核苷酸序列；

步骤2：利用步骤1所得的核苷酸序列构建PEBP1重组质粒，转化大肠杆菌，培养，诱导，纯化，得到PEBP1重组蛋白。