[发明专利]一种保健品中β-烟酰胺单核苷酸的快速测定方法

说明书

本发明公开了一种保健品中β‑烟酰胺单核苷酸的快速测定方法，属于保健品检测技术领域。该方法包括以下具体步骤：(1)保健品前处理；(2)浸提处理；(3)提取液净化及上机检测；(4)标准溶液配制；(5)化合物优化。本发明是一种工艺简单、前处理简便、同时能够有效的、快速的、准确的测定保健品中β‑烟酰胺单核苷酸的含量的测定方法，该方法灵敏度高、选择性好、线性范围宽、不仅适用于保健品中含量检测、同时也适用于蔬菜、水果、中药中营养成分分析，是保健中β‑烟酰胺单核苷酸快速、高效、经济、实用、准确的测定方法和手段。

技术领域

本发明属于保健品检测技术领域，具体为一种保健品中β-烟酰胺单核苷酸的快速测定方法。

背景技术

β-烟酰胺单核苷酸是哺乳动物体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸补救合成途径的前体物质，是人体内一种内源性物质。β-烟酰胺单核苷酸作为保健品中的主要成分，在延缓衰老、治疗老年病，调节胰岛素分泌，调控mRNA的表达方面具有一定治疗作用。如何快速测定保健品中β-烟酰胺单核苷酸是目前急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种保健品中β-烟酰胺单核苷酸的快速测定方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

本发明采用的技术方案如下：

一种保健品中β-烟酰胺单核苷酸的快速测定方法，包括以下具体步骤：

(1)保健品前处理

选取一种保健食品，从包装中随机取出若干颗粒，称量每粒保健品质量进行加和，算出其平均值作为保健品的平均质量，将保健品放入研钵中将其研碎，过100-120目筛，装入干净的塑封袋中备用；

(2)浸提处理

称取处理好的样品粉末0.3-0.5g，平均分装在三个聚四氟乙烯旋盖离心管中，在三个试管中分别加入相同体积的甲醇溶液、体积比为1:1的甲醇和水作为提取液，在冰浴环境下高速均质，其转速为20000-25000r/min，浸提3-5min，将离心管取出后，在冷冻离心机中转速为8000-10000r/min离心2-3min，最后取上清液进行净化处理；

(3)提取液净化及上机检测

将通过步骤(2)所得的三种浸提液分别转入依次用3-6mL甲醇和3-6mL一级水在重力作用下活化好的C18固相萃取柱中，收集净化后的液体于比色管中，用2.5mL注射针管取比色管中上清液，0.22μm有机滤头过滤，将滤液按照一定比例稀释后，利用液相色谱串联质谱仪对处理好的样品进行上机检测，如滤液稀释后检测浓度值超出标准曲线线性范围，则进一步稀释再上机，直至在标准浓度控制的线性范围内；

(4)标准溶液配制

母液制备：准确称取β-烟酰胺单核苷酸标准物质25.00mg，乙腈定容到25mL容量瓶中，调整浓度为1.0mg/L作为母液；

中间储备液制备：准确移取1.0mg/L母液100μL，乙腈定容至100mL容量瓶中，调整储备液浓度为1μg/mL；

工作液制备：分别移取不同体积中间储备液，按照流动相初始比例配制浓度分别为10ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL的混合标准溶液；

(5)化合物优化

质谱条件优化：将步骤(4)制得的浓度为1μg/mL的β-烟酰胺单核苷酸的中间储备液进行质谱条件的优化，通过调整包括喷雾电压、鞘气压力、辅助气压力、毛细管温度、雾化器温度离子源参数，使该物质的母离子和子离子碎片能够达到最大程度的响应，提高β-烟酰胺单核苷酸检测的灵敏度；

液相条件优化：通过调整流动相的流速、液相有机相和水相的比例，以及洗脱条件等，提高β-烟酰胺单核苷酸的响应值及灵敏度。