[发明专利]一种快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法

权利要求书

1.一种快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备琼脂糖微球；

2)将IgG交联在琼脂糖微球上；

3)将交联有IgG的琼脂糖微球加入到待检测牛奶样品中，经过培养以扩大细菌数量后，采用MTT法进行显色，如果MTT转变为紫色，则提示样品中含有金葡菌。

2.根据权利要求1所述的快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的琼脂糖微球的制备包括：

(1.1)水相配置：将琼脂糖加入含NaCl的生理盐水中，微波加热至溶液变澄清，置80℃～95水浴保温以去除气泡，得到水相；

(1.2)油相配置：配置含Span80的液体石蜡，搅拌均匀后，加热至65℃～85℃，得到油相；

(1.3)将水相和油相按体积比1：2～6混合，2000～4000rpm乳化5～20min，乳化过程在50℃～70℃水浴锅中进行；

(1.4)乳化完成后，将乳化产物置于2～8℃环境中保持5～15min；

(1.5)乳化产物依次用去离子水离心、体积百分数10％～50％乙醇水溶液和无水乙醇洗涤；

(1.6)沉淀经筛网过滤，收集琼脂糖微球。

3.根据权利要求2所述的快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤(1.1)中，所述的水相中琼脂糖质量分数为1％～5％。

4.根据权利要求2所述的快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤(1.2)中，所述的油相中Span80的体积百分数为1％～4％。

5.根据权利要求2所述的快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤(1.3)中，将水相和油相按体积比1：2～6混合。

6.根据权利要求1所述的快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤2)中，将IgG交联在琼脂糖微球上，具体包括：

(2.1)取琼脂糖微球，用去离子水离心洗涤；

(2.2)将洗涤后的琼脂糖微球加入含环氧氯丙烷的碳酸钠水溶液中，置摇床中震摇；

(2.3)震摇后，用去离子水洗涤琼脂糖微球，再用碳酸钠水溶液洗涤；

(2.4)将IgG抗体溶于PBS中，配成浓度为1～4mg/mL IgG的PBS溶液，以0.2～0.5M碳酸钠溶液为缓冲液，透析1～4h，得到纯化的IgG溶液；

(2.5)将步骤(2.3)得到的琼脂糖微球与纯化的IgG溶液混合，震摇12h～24h，得到IgG-琼脂糖微球；

(2.6)将IgG-琼脂糖微球用去离子水洗涤，加入含乙醇胺的碳酸钠水溶液中作用1～3h去除非特异性吸附，PBS洗涤，完成IgG交联在琼脂糖微球。

7.根据权利要求6所述的快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤(2.2)中，含环氧氯丙烷的碳酸钠水溶液中碳酸钠的浓度为0.2～0.6M，含环氧氯丙烷的碳酸钠水溶液中环氧氯丙烷的质量百分数为2％～10％。

8.根据权利要求6所述的快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤(2.3)中，所述的碳酸钠水溶液的浓度为0.2～0.5M。

9.根据权利要求6所述的快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤(2.5)中，震摇12h～24h。

10.根据权利要求6所述的快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤(2.6)中，所述的含乙醇胺的碳酸钠水溶液中乙醇胺的质量百分数为2％～10％；所述的含乙醇胺的碳酸钠水溶液中碳酸钠的浓度为0.2～0.6M。