[发明专利]一种用生物反应装置培养人参不定根的方法

权利要求书

1.一种用生物反应装置培养人参不定根的方法，其特征在于，包括：

（1）将成熟人参清洗消毒，切片，接种到诱导培养基中诱导出人参不定根；

（2）将（1）获得的人参不定根再次接种到诱导培养基中，暗培养；

（3）将（2）获得的人参不定根接种到液体培养基中，100-130rpm摇床，暗培养；

（4）将（3）获得的人参不定根接种到含有液体培养基的生物反应装置中，暗培养，获得人参不定根；

步骤（1）和步骤（2）中，所述诱导培养基的组成为1-6mg/L萘乙酸，0.2-1mg/L赤霉素，0.1-0.6mg/L激动素，0.075-1.5g/L柠檬酸，0.03-1g/L抗坏血酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝胶，1-4g/L B5培养基和1-2.4g/L WPM培养基；

步骤（3）和（4）中，液体培养基的组成为10-55g/L蔗糖，0.6-1.6g/L B5培养基，0.3-1.2g/L 1/2MS培养基，0-5.4 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤，0.6-5.4 mg/L 萘乙酸， 0-8 mg/L 赤霉素，0.6-5.4 mg/L吲哚乙酸，0.6-5.4 mg/L吲哚丁酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，生物反应装置的通气量为0.05-0.5vvm。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，生物反应装置的通气量为0.2-0.3vvm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述生物反应装置包括罐体，罐体的底壁的高度由四周向中心逐渐降低，形成上大下小的倒锥形；出料口设置在中心最低的位置，至少两个进气装置围绕出料口间隔均匀分布在由四周向中心逐渐降低的底壁上。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，所述的液体培养的组成为15-45g/L蔗糖，0.8-1.3g/L B5培养基，0.5-1.0g/L 1/2MS培养基，0-4.2 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤，1.8-5.4mg/L 萘乙酸，0-8 mg/L 赤霉素，0.6-4.8 mg/L吲哚乙酸，0.6-3.6 mg/L吲哚丁酸。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的液体培养基的组成为45g/L蔗糖，1.28g/L B5培养基，0.905g/L 1/2MS培养基，4.2 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤，3 mg/L 萘乙酸，0.8 mg/L 赤霉素，0.6 mg/L吲哚乙酸，0.6 mg/L吲哚丁酸。

7.根据权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，将不定根接种到液体培养基中，接种的不定根的质量占液体培养基体积的0.3%-2.0%。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，接种的不定根的质量占液体培养基体积的0.6%-1.2%。

9.根据权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，灭菌的液体培养基的体积占生物反应装置容积的30%-80%。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，灭菌的液体培养基的体积占生物反应装置容积的40%-70%。

11.根据权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，步骤（1）和（2）中，22±1°C条件下暗培养4~5周，步骤（3）中，22±1°C条件下暗培养3~4周。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导培养基的组成为4mg/L萘乙酸，0.6mg/L赤霉素，0.4mg/L激动素，0.1g/L柠檬酸，0.05g/L抗坏血酸，30g/L蔗糖，3g/L植物凝胶，1.55g/L B5培养基和1.21g/L WPM培养基。