[发明专利]新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株及其构建方法

说明书

本发明公开了一株新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株及其构建方法，属于病毒疫苗株构建技术领域。本发明新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株的构建方法，是将副粘病毒科VII型新城疫病毒的N、F基因与同属于副粘病毒科的犬瘟热病毒的P、M、H、L基因进行重组，将新型冠状病毒S1基因插入重组病毒的P基因与M基因之间获得新型冠状病毒肺炎副粘病毒的全基因组；通过反向遗传操作构建而成。本发明构建的新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株能够稳定高效表达新冠S1蛋白，注射动物后能够诱导机体产生抗体。而且，可以在禽类和犬类中进行实验，能够节约时间、降低成本，同时由于其产量大，更利于实际生产。

技术领域

本发明属于病毒疫苗株构建技术领域，具体涉及一株新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株及其构建方法。

背景技术

2019年以来，新冠病毒肆虐，在全球广泛传播，造成了大量的人员伤亡。目前虽有疫苗问世，但产量较低，远远不能满足市场需要。目前有研究表明，新冠S蛋白在病毒感染以及诱导产生中和抗体方面有重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一株新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株及其构建方法。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株的构建方法，将VII型新城疫病毒的N、F基因与犬瘟热病毒的P、M、H、L基因进行重组，将新冠病毒S1基因插入重组病毒的P基因与M基因之间获得新型冠状病毒肺炎副粘病毒的全基因组；通过反向遗传操作构建而成。

在本发明的一个实施例中，所述反向遗传操作为：将构建的新型冠状病毒肺炎副粘病毒的全基因组重组载体与分别包含NP、P、L基因的三个辅助重组质粒转染能够表达T7RNA聚合酶的细胞系；经培养获得新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株。

在本发明的一个实施例中，所述能够表达T7 RNA聚合酶的细胞系是由T7 RNA聚合酶基因与PCI-neo载体连接后，转染BHK-21细胞获得的。

上述方法构建的新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株，保藏编号为CCTCC NO:V202119，地址为中国武汉，武汉大学的中国典型培养物保藏中心。

上述新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株在制备疫苗中的应用。

在上述方案的基础上，所述疫苗对2019-nCoV引起的新型冠状病毒肺炎具有预防保护作用。

本发明技术方案的优点

本发明将新冠病毒S1基因插入重组病毒载体，构建的新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株能够稳定高效表达新冠S1蛋白，注射动物后能够诱导机体产生抗体。该种方法改造的疫苗株可以方便在鸡胚中繁殖且操作简单，成本低、产量大，更利于实际生产。而且该疫苗株也可以在禽类和犬类中进行实验，能够节约时间、降低成本。

此外，现有痘病毒、腺病毒载体存在预存免疫，疱疹病毒的亲神经性可能导致安全问题。本发明中采用的犬瘟热病毒属于副粘病毒科病毒，麻疹病毒属，对哺乳动物细胞具有侵染性但对人不致病，犬瘟热病毒能够稳定表达外源蛋白，而且非人为情况下几乎不会发生基因突变现象，是一种良好的疫苗载体。新城疫病毒属于副粘病毒科病毒，可以在哺乳动物细胞或者9-11日龄鸡胚中繁殖培养，具有操作简单，成本低、产量大等优点。最终，本发明方法构建的疫苗株在细胞质进行复制，不会整合到宿主基因组中，且病毒载体几乎不发生基因突变，安全性高；可在鸡胚上增殖，生产成本低。

附图说明

图1新型冠状病毒肺炎副粘病毒疫苗株表达S1蛋白的鉴定。

具体实施方式

在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。