[发明专利]一种水环境中微量雌激素类物质的检测方法

权利要求书

1.一种水环境中微量雌激素类物质的检测方法，其特征在于：步骤如下：

（1）水样的预处理

水样经玻璃纤维膜过滤去除不溶性悬浮颗粒，加入EDTA-2Na溶解，加入雌激素内标混合储备液，并调节pH至9；

（2）固相萃取富集目标雌激素

依次用乙酸乙酯、甲醇和超纯水对固相萃取柱进行活化；将步骤（1）中处理过的水样经已活化的固相萃取柱富集；再在负压下用淋洗液淋洗固相萃取柱；并在常压下用一定体积的洗脱溶剂洗脱目标物，收集洗脱液并进行氮吹，后定容；过滤后置于进样瓶中，待测；

（3）采用高效液相色谱串联质谱法对水环境中雌激素类物质的含量检测

采用内标法，在高效液相色谱串联质谱仪上，定量检测经步骤（2）处理得到的进样瓶内的待测样品中从水环境中富集到的雌激素类物质的含量；所述的雌激素物质包括雌酚酮、17β雌二醇、雌三醇、炔雌醇、双烯雌酚和双酚A。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，加入100 μL的1 mg/L E2-D3、EE2-D4、己烯雌酚-D8和BPA-D8这四种内标物质混合储备液。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，以孔径为0 .47mm的玻璃纤维滤膜进行过滤；加入EDTA-2Na使水样中的浓度达到0.0014 mol/L以屏蔽Ca²⁺和Mg²⁺；所述调节pH至9为采用1 mol/L NaOH调节。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所用的固相萃取柱是CNW® HC-C18小柱，其吸附剂为烷基键合二氧化硅，更适合于萃取极性相对较弱的化合物。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，水样以2 mL/min 的流速载入到活化后的萃取柱上进行富集，富集结束后继续抽真空30min。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，淋洗固相萃取柱依次用甲醇水溶液和pH 9.0 超纯水以洗去干扰杂质，流速为1mL/min，淋洗结束后抽真空干燥10min；

所述淋洗液中，所述甲醇水溶液的浓度为5％。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所述洗脱溶剂为纯甲醇；洗脱液置于35 ℃ 的恒温水浴中，以15 L/min 温和的氮气流下吹至近干；用纯甲醇定容后，超声溶解10 min，再经0.22 μm 聚四氟乙烯滤头过滤。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）中，选用日本岛津公司的LCMS-8050高效液相色谱串联质谱仪；所使用的色谱柱为C18液相色谱柱2 .1mm×100mm×1.9μm。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）中，液相色谱条件如下：

色谱柱柱温40℃；进样量5μL；流动性流速0.4 mL/min；流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为0.075‰ 氨水溶液，所述流动相B为体积比1:1的甲醇和乙腈的混合溶液；梯度洗脱程序为：0-1.5min，35％B；1.5-6.5min，35-75％B；6.5-6.6min，75-95%B；6.6-8.0min，95％B；最后，还原初始流动相状态并保持2min。

10.根据权利要求1或8所述的检测方法，其特征在于，步骤（3）中，质谱检测条件为：电喷雾电离负离子模式（ESI-）；扫描模式为多反应监测（MRM）；碰撞气体为氩气；雾化气体为氮气流量为3 L/min；干燥气和加热气均为氮气流量为10 L/min；DL温度为250℃；加热模块温度为400℃。