[发明专利]一种分离油菜籽中黑芥子酶的方法

说明书

本发明公开了一种分离油菜籽中黑芥子酶的方法，其包括如下步骤：菜籽研磨后过筛，加入正己烷后超声处理，弃去上层脂肪后加入缓冲液进行超声提取，过滤后的溶液在低温处理，低温离心取沉淀复溶再进行透析，随后使用葡萄糖凝胶得到浓缩酶液，本发明提供的方法简便、速度快，消耗的原料少，操作方便、抗干扰能力强，提取得到的黑芥子酶纯度高、损失小。

技术领域

本发明涉及食品工程领域，特别是涉及一种分离油菜籽中黑芥子酶的方法。

背景技术

油菜籽为十字花科作物油菜的种子，其含油量为35％～42％，是我国主要的油料之一，其年产量仅次于大豆。黑芥子酶(学名：β-硫代葡萄糖苷酶)是主要存在于十字花科植物中的一种水解硫代葡萄糖苷的酶。在菜籽油加工过程中，籽中的黑芥子酶会部分水解分布于细胞液泡中的硫代葡萄糖苷，生成硫氰酸酯、异硫氰酸酯等物质，赋予了菜籽油辛辣的刺激性风味。同时黑芥子酶降解籽中硫代葡萄糖苷能降低菜籽饼粕中硫代葡萄糖苷含量，有利于提升饼粕品质。油菜籽中黑芥子酶活性是影响菜籽中硫代葡萄糖苷水解程度的重要因素之一。

在黑芥子酶的提取过程中，提取方式和条件选取不当会影响黑芥子酶活性。此外，对于油菜籽这种高含油的种子，芥子酶提取纯度易受油脂等杂质的干扰。因此，针对油菜籽这种高含油种子，目前用于黑芥子酶的制备中存在着可操作性低、原料如试剂使用量较大、成本较高的问题。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有黑芥子酶产品中存在的问题，提出了本发明。

因此，本发明其中一个目的是，克服现有黑芥子酶获得方法的不足，提供一种分离油菜籽中黑芥子酶的方法。

为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方案：一种分离油菜籽中黑芥子酶的方法，其包括如下步骤：

取真空冷冻干燥后的菜籽，液氮研磨后过筛；

加入正己烷后超声处理，超声处理体系处于恒温环境中，处理完成后静置并弃掉上层液体；

将超声处理弃掉液体的剩余固体加入乙二胺四乙酸、二硫苏糖醇、聚乙烯吡咯烷酮的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液加入脱脂且低温真空干燥脱溶后的菜籽中，超声提取再离心取上清液用纱布过滤；

过滤后的溶液加入硫酸铵粉末完全溶解后冰水浴1h；

低温离心取沉淀部分加三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液复溶，转移至透析袋冰水浴透析直至透析液不含硫酸根离子；

在4℃下将透析袋埋入干燥的葡萄糖凝胶G15中，得到浓缩酶液。

作为本发明所述分离油菜籽中黑芥子酶的方法的一种优选方案，其中：干燥方式为真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥时间为48h。

作为本发明所述分离油菜籽中黑芥子酶的方法的一种优选方案，其中：过滤后的溶液加入硫酸铵粉末后完全溶解后冰水浴1h中，所述硫酸铵溶解后的质量分数为10～30％。

作为本发明所述分离油菜籽中黑芥子酶的方法的一种优选方案，其中：菜籽研磨后过筛，研磨方式为液氮研磨。

作为本发明所述分离油菜籽中黑芥子酶的方法的一种优选方案，其中：超声处理中加入正己烷的混合溶液处于4℃恒温水浴中。

作为本发明所述分离油菜籽中黑芥子酶的方法的一种优选方案，其中：超声处理的设置为80～100W，30min。

作为本发明所述分离油菜籽中黑芥子酶的方法的一种优选方案，其中：超声处理的设置为90W，30min。