[发明专利]一种牛溶血性曼氏杆菌菌株及由其制备的灭活疫苗和疫苗制备方法

说明书

本发明公开了一种牛溶血性曼氏杆菌菌株及由其制备的灭活疫苗和疫苗制备方法，属于兽用生物制品制备技术领域。提供的灭活疫苗中抗原为经筛选获得的增殖能力和毒力均较强的牛溶血性曼氏杆菌CGMCC No.16895，由其制备的灭活疫苗注射剂量为3ml时即可对免疫牛产生有效且稳定的免疫保护效果，并且安全性良好，不会在注射部位产生脓肿和结节，可以对流行的“船运热”疫病提供良好的预防效果。

技术领域

本发明属于兽用生物制品制备技术领域，具体涉及一种牛溶血性曼氏杆菌菌株及由其制备的灭活疫苗和疫苗制备方法，尤其涉及一种具有较高的毒力效果的牛溶血性曼氏杆菌菌株及由其制备的具有良好的安全性和免疫保护效果的牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗。

背景技术

牛曼氏杆菌病是牛的重要呼吸道传染病，又称为“船运热”，引发该病的病原为牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)，属于曼氏杆菌属(Mannheimia)，是健康牛上呼吸道中的条件致病菌，在应激因素作用下，可引起内源性感染，一般在受到应激1～2周后出现典型的肺炎症状，潜伏期最短为1～3天。

牛曼氏杆菌病多呈地方性流行或散发，发病动物以幼龄为主，病死率较高。该病的发生一般无明显的季节性，但在冷热交替、气候剧变、闷热、潮湿、多雨的季节发生较多。体温失调、抵抗力降低也是该病的主要诱因之一。目前，发生疫病流行的地区主要采取一些减少或降低对动物应激反应的预防措施，发生疫病后只能采取对症治疗，普遍采用的方法是大范围使用抗生素，防治效果均不理想，也极易导致具备多种药物抗性的溶血性曼氏杆菌变种的出现。

对牛曼氏杆菌病疫情防控的最有效策略是疫苗防控，然而目前国内外对于牛溶血性曼氏杆菌的研究基本集中在菌种特性、致病机理上，疫苗制造也多在实验室阶段。高佳滨等人(高佳滨，陈为宏等，牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗的制备与检定，中国生物制品学杂志，2014年8月第27卷第8期，以下称文献1)采用牛溶血性曼氏杆菌菌液与弗氏佐剂或灭菌氢氧化铝胶混合制备牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗，两种灭活疫苗对小鼠的保护效果分别达到90％和80％，但是将疫苗注射昆明小鼠后，弗氏佐剂灭活疫苗组小鼠在注射部位产生结节，氢氧化铝胶佐剂灭活疫苗组小鼠在注射部位产生脓肿和结块，因此，该文献1的灭活疫苗的安全性较差，不宜用于临床。专利文献CN109847060A(以下称文献2)公开一种牛多杀性巴氏杆菌病、溶血性曼氏杆菌病二联灭活疫苗，其中抗原采用荚膜A型牛多杀性巴氏杆菌LY01株和血清A6型牛溶血性曼氏杆菌LY02株，能够同时针对性预防目前流行的牛纤维素性化脓性肺炎和肉牛地方流行肺炎，但是该二联灭活疫苗注射后会造成免疫牛短时间内(注射后48h内)的体温升高，存在潜在的安全性风险，并且对小鼠的免疫攻毒试验结果也表明，该文献2公开的二联灭活疫苗对两种病原菌株攻毒的保护能力仍有不足，其中保护能力最高仅为80％，最低只能实现40％的保护效果。专利文献CN111088182A(以下称文献3)也公开一种溶血性曼氏杆菌灭活疫苗，其采用的抗原为溶血性曼氏杆菌A1型M164株，但是在使用该灭活疫苗的免疫攻毒试验中，在攻毒后仅连续观察4日，不能准确反映该灭活疫苗对试验牛的免疫保护效果，并且各免疫组试验牛的肺脏剖检结果多出现较大面积的牛曼氏杆菌病特征性病灶，甚至超过对照组试验牛，反映出该文献3公开的灭活疫苗存在安全性问题，并且间接反映出该灭活疫苗的免疫保护能力仍不足。

发明内容

针对现有技术中存在的一个或多个问题，本发明的一个方面提供一种牛溶血性曼氏杆菌菌株，其保藏编号为：CGMCC No.16895，保藏日期为：2018年11月27日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

本发明另一方面提供一种牛溶血性曼氏杆菌病灭活疫苗，其包含佐剂和抗原，其中所述抗原为权利要求1所述的牛溶血性曼氏杆菌菌株CGMCC No.16895。

上述牛溶血性曼氏杆菌病灭活疫苗中，所述抗原的有效含量不低于1.3×10¹⁰CFU/ml。

上述牛溶血性曼氏杆菌病灭活疫苗中，所述佐剂和抗原的体积比为1:3～1:7。