[发明专利]一种牛溶血性曼氏杆菌菌株及由其制备的灭活疫苗和疫苗制备方法

权利要求书

1.一种牛溶血性曼氏杆菌菌株，其保藏编号为：CGMCC No.16895，保藏日期为：2018年11月27日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

2.一种牛溶血性曼氏杆菌病灭活疫苗，其包含佐剂和抗原，其中所述抗原为权利要求1所述的牛溶血性曼氏杆菌菌株CGMCC No.16895。

3.根据权利要求2所述的牛溶血性曼氏杆菌病灭活疫苗，其中所述抗原的有效含量不低于1.3×10¹⁰CFU/ml。

4.根据权利要求2或3所述的牛溶血性曼氏杆菌病灭活疫苗，其中所述佐剂和抗原的体积比为1:3～1:7。

5.根据权利要求2或3所述的牛溶血性曼氏杆菌病灭活疫苗，其中所述佐剂为氢氧化铝胶佐剂。

6.权利要求2-5中任一项所述的牛溶血性曼氏杆菌病灭活疫苗的制备方法，其包括以下步骤：

T1：培养权利要求1所述的牛溶血性曼氏杆菌菌株CGMCC No.16895，获得培养菌液；

T2：将步骤T1获得的培养菌液浓缩，灭活，得到灭活抗原菌液；

T3：将步骤T2获得的灭活抗原菌液与佐剂混匀，制备得到灭活疫苗。

7.根据权利要求6所述的方法，步骤T1中所述获得培养菌液的具体操作为：

将所述牛溶血性曼氏杆菌菌株CGMCC No.16895按v/v为1％～2％的接种量接种于TSB培养基，置37±1℃，100～150r/min培养8～12h，获得培养菌液。

8.根据权利要求6或7所述的方法，步骤T1中所述获得培养菌液的具体操作为：

一级种子繁殖：将所述牛溶血性曼氏杆菌菌株CGMCC No.16895冻干菌种接种于TSB培养基，置37±1℃，100～150r/min培养8～12h，然后划线接种于TSA平板，37±1℃培养8～12h，显微镜下挑选典型菌落，分别接种TSA斜面若干支，37±1℃培养8～12h，作为一级种子；

二级种子繁殖：取所述一级种子接种于TSB培养基，置37±1℃、100～150r/min，培养8～12h，作为二级种子；

培养菌液制备：将所述二级种子按v/v为1％～2％的接种量接种于TSB培养基，37±1℃、100～150r/min，培养8～12h。

9.根据权利要求6或7所述的方法，步骤T2中所述培养菌液浓缩的具体操作为：2500～3500r/min，4±1℃，离心15～25min，随后收集菌体沉淀，并用pH 7.2～7.4的无菌PBS重悬，制成浓缩菌液。

10.根据权利要求6或7所述的方法，步骤T2中所述灭活的具体操作为：按浓缩菌液体积的0.1％～0.15％加入甲醛溶液，37±1℃灭活8～10小时，期间摇匀数次，制备得到灭活抗原菌液。