[发明专利]一种免疫磁性表面增强拉曼基底检测丝素蛋白的方法

说明书

本发明涉及文物检测领域，本发明公开了一种免疫磁性表面增强拉曼基底检测丝素蛋白的方法，本发明结合表面增强拉曼和抗原抗体的优越性，提供了一种具有表面增强拉曼传感器的优势，又兼具免疫特异性的优点的丝素蛋白检测方法。本发明利用磁珠的顺磁性，合成的材料与反应体系可以更好的分离，便于合成材料的洗涤与纯化。本发明利用了Au的表面增强效果，且在SiO₂和Fe₃O₄的保护作用下非常的稳定。此外由于抗原抗体的特异性结合，本发明有益于排除各项杂质的干扰，提高了结果的准确性。

技术领域

本发明涉及文物检测领域，尤其涉及一种免疫磁性表面增强拉曼基底检测丝素蛋白的方法。

背景技术

中国纺织品文化由来已久，丝绸之路作为中国对外文化交流的一条重要渠道，在中国发展史上画了浓墨重彩的一笔，出土的丝绸在中国的历史文化研究中也起到至关重要的作用。所以研究各种丝绸的各种表征手段是对中国丝绸文化研究的关键点。

丝绸在长时间的埋藏过程中很难完整保护，由于各种老化机理导致丝绸的表征非常困难，当其结构被破坏时，各种表征结果都将失去他们原有的特征，当发现的墓葬离我们越遥远，能保留下来的丝绸残片就越少，各种干扰就越多，所以低检出限和高特异性就是丝绸研究的关键。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种免疫磁性表面增强拉曼基底检测丝素蛋白的方法，本发明结合表面增强拉曼和抗原抗体的优越性，提供了一种具有表面增强拉曼传感器的优势，又兼具免疫特异性的优点的丝素蛋白检测方法。

本发明的具体技术方案为：

一种免疫磁性表面增强拉曼基底检测丝素蛋白的方法，包括以下步骤：

1）称取5-6g FeCl₃·6H₂O和2-4gFeSO₄·7H₂O溶解在蒸馏水中，将溶液倒入容器中，在充氮气的条件下搅拌至溶解；加入3-5gNaOH，70-90℃水浴持续搅拌0.5-1.5h制得Fe₃O₄磁性纳米颗粒。

2）称取200 mg Fe₃O₄于容器中，加入15-20mL浓硝酸，超声10-30 min，随后水洗，加入15-25 mL无水乙醇，35-45mL去离子水及 3-5 mL氨水超声10-30min后取出，搅拌下缓慢滴加3-4mL TEOS，持续搅拌3-5h，随后乙醇洗，水洗，转移到比色皿中， 55-65℃条件下真空干燥1-3h得到Fe₃O₄@SiO₂纳米颗粒。

3）取150-200 mL去离子水于容器中，加入8-12 mL 1.5-2.5%HAuCl₄，在400-800r/min，120-140℃条件下搅拌20-30 min，随后加入8-12 mL、40-60mg/mL柠檬酸钠水溶液，在120-140℃条件下继续搅拌 20min，然后停止加热，继续搅拌至Au 溶胶为室温。

4）量取30-50 mg Fe₃O₄@SiO₂于容器内，倒入50-100mL无水乙醇超声清洗 1-10min，重复，再水洗，随后加入30-50 mL 2-4%的聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液，35-45℃摇晃溶液至溶解，搅拌 15-25 min，水洗4-8次，得到聚二烯丙基二甲基氯化铵修饰的 Fe₃O₄@SiO₂。