[发明专利]一种从瓮棺土样中提取羊毛角蛋白进行蛋白质组学检测的方法

说明书

本发明涉及文物检测领域，本发明公开了一种从瓮棺土样中提取羊毛角蛋白进行蛋白质组学检测的方法，本发明通过将免疫学与蛋白质组学结合，既可以充分提取样品中的毛类蛋白质，又可以检测出这些毛类蛋白质老化过程中的肽段损失。且操作方便，蛋白损伤性能小。

技术领域

本发明涉及文物检测领域，尤其涉及一种从瓮棺土样中提取羊毛角蛋白进行蛋白质组学检测的方法。

背景技术

中国纺织品文化由来已久，从已出土的纺织品文物残片可以得知纺织品的历史至少可以追溯到5500年，而毛作为一种获取简单，性能优异的纤维材料，在中国古代纺织品中有着不可替代的地位。中国最开始的农耕文明就开始对动物的训化，在中国悠久的历史里，动物毛的利用很可能可以追溯到更加古老的时代。羊作为新石器时代就被驯服的动物，羊毛无可厚非的成为了古代人们纺织品的主要原材料之一。

羊毛作为生物的一部分，其主要成分是蛋白质，而作为有机物的羊毛织物在长时间的埋藏过程中，各种微生物、酸、碱等的侵袭中难以完整保存下来，这为探索织物起源与发展带来了非常大的挑战。如何在织物宏观特征消失的情况下确定它的存在，找到考古材料中存在的微乎其微的分子证据成为研究早期毛织物的关键。所以我们需要对仅存的蛋白质残余进行富集，用于样品需求更加微量的检测手段。

目前检测羊毛的方法有很多种，如电镜，红外，切片等，需要丝纤维保存较完整，所以需要一种更好的检测方法对毛的存在的证据和毛的蛋白质姐妹分支进行表征，同时排除非毛蛋白质的干扰。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种从瓮棺土样中提取羊毛角蛋白进行蛋白质组学检测的方法。本发明通过将免疫学与蛋白质组学结合，既可以充分提取样品中的毛类蛋白质，又可以检测出这些毛类蛋白质老化过程中的肽段损失。且操作方便，蛋白损伤性能小。

本发明的具体技术方案为：

一种从瓮棺土样中提取羊毛角蛋白进行蛋白质组学检测的方法，包括以下步骤：

1）取500mg氨基化的磁性纳米颗粒，加入到40-60mL PBS缓冲液中，超声分散；加入150-250mL、20-30wt%戊二醛溶液，在30-40℃的振荡水浴锅中振荡反应2-3小时。

2）磁性分离固液相，用PBS缓冲液清洗3-5遍，之后将活化后的磁性纳米颗粒分散在40-60mL PBS缓冲液中，得到5-15mg/mL的磁性纳米粒子溶液。

3）取30mL上述磁性纳米粒子溶液，向其中加入含有20-55mg兔抗角蛋白单克隆抗体的BSA溶液，在30-40℃下振荡反应1-3h。

本发明中抗体不局限于兔抗角蛋白抗体，加入羊毛中含有的其它蛋白质抗体合成多种单一免疫磁珠，可以提高蛋白质获取丰度且不会降低特异性。

4）取100mg混有羊毛角蛋白的瓮棺土样溶解在碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中，在50-80℃的震荡水浴锅中溶解2-3h后冷却。

5）用PBS缓冲液洗涤步骤3）中所得的免疫磁珠，加入步骤4）中所得的瓮棺土样提取液，在30-40℃条件下震荡孵育1-3h。

可以同时加入多种单一免疫磁珠共同提取，确保提取到所有想要的蛋白质结果，保证了提取蛋白质的准确性与完整性。

6）磁性分离，PBS缓冲液洗涤，除去杂质和上清液，得到羊毛角蛋白结合的免疫磁珠。