[发明专利]一种抗PD-L2纳米抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种抗PD‑L2纳米抗体及其衍生物和用途。具体地，本发明提供了一种抗PD‑L2的纳米抗体、编码所述纳米抗体的基因序列、相应的表达载体和能够表达该纳米抗体的宿主细胞，以及本发明纳米抗体的生产方法。本发明还提供了同时具有本发明PD‑L2纳米抗体的融合蛋白。本发明的抗PD‑L2纳米抗体和融合蛋白具有PD‑L2高亲和性，并且能够有效阻断PD‑L2与受体PD‑1的结合。

技术领域

本发明属于生物医学或生物制药技术领域，更具体地涉及一种抗PD-L2纳米抗体及其应用。

背景技术

PD-1(程序性死亡受体1)，也称为CD279(分化簇279)，是一种重要的免疫抑制分子，为免疫球蛋白超家族，是一个288氨基酸残基的膜蛋白。其最初是从凋亡的小鼠T细胞杂交瘤2B4.11克隆出来。

PD-1是免疫检查点，通过两种机制防止自身免疫。首先，它促进淋巴结中抗原特异性T细胞的凋亡(程序性细胞死亡)。其次，它减少了调节性T细胞(抗炎，抑制性T细胞)的细胞凋亡。通过向下调节免疫系统对人体细胞的反应，以及通过抑制T细胞炎症活动来调节免疫系统并促进自身耐受。这可以预防自身免疫性疾病，但它也可以防止免疫系统杀死癌细胞。以PD-1为靶点的免疫调节对抗肿瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及器官移植存活等均有重要的意义。

PD-1至少有两个配体，分别是PD-L1和PD-L2。

PD-L2是PD-1的第二配体，在DC细胞、巨噬细胞、人原发性鼻上皮细胞、Th2细胞、活化的T细胞和一些B细胞亚群都有上表达。在人T细胞上，PD-L2作为T细胞活性的负调控因子，通过与PD-1的相互作用抑制细胞增殖、IL-2和IFN-γ的产生。使用PD-L2-Ig治疗可以降低小鼠的TC-1肺肿瘤负担并增加生存，这可能是通过消耗表达高水平PD-1的T细胞。

单克隆抗体在癌症的检测及生物靶向治疗方面成功的应用，引起了肿瘤治疗的变革。然而，传统的单抗(150kD)分子质量过大，难穿透组织，造成肿瘤区域的有效浓度较低，治疗效果不充分；传统的抗体具有很高的免疫原性，而改造的抗体很难达到原来的亲和力。此外，完全人源化的传统抗体开发周期长，生产成本高，稳定性不够等诸多因素限制其在临床中的应用及普及。

纳米抗体是目前最小的抗体分子，其分子量是普通抗体的1/10。纳米抗体除具备单克隆抗体的抗原反应性外，还拥有一些独特的功能特性，如分子质量小，稳定性强、可溶性好、易表达、免疫原性弱、穿透性强、靶向性强、人源化简单，制备成本低廉等，几乎完美克服了传统抗体开发周期长，稳定性较低，保存条件苛刻等缺陷。

然而，目前本领域尚缺乏令人满意的针对PD-L2的纳米抗体。因此，本领域迫切需要开发新的有效针对PD-L2的特异性纳米抗体。

发明内容

本发明的目的就是提供一类新的有效针对PD-L2的特异性纳米抗体。

在本发明的第一方面，提供了一种抗PD-L2纳米抗体VHH链的互补决定区CDR区，所述VHH链的互补决定区CDR由以下组成：

氨基酸序列如SEQ ID NO:5n+1所示的CDR1；

氨基酸序列如SEQ ID NO:5n+2所示的CDR2；和

氨基酸序列如SEQ ID NO:5n+3所示的CDR3；

其中，各n独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13。

在另一优选例中，所述的n为2或11。

在另一优选例中，所述的CDR1、CDR2和CDR3由VHH链的框架区FR1、FR2、FR3和FR4所隔开。

在本发明的第二方面，提供了一种抗PD-L2纳米抗体的VHH链，所述抗PD-L2纳米抗体的VHH链中包括如本发明第一方面所述的CDR1、CDR2和CDR3。