[发明专利]一种检测蛹虫草中虫草素含量的方法

说明书

本发明涉及一种检测蛹虫草中虫草素含量的方法，包括(1)收集蛹虫草的菌丝体和发酵上清液，制备待测品；将待测品1、2以及配好的虫草素标准品溶液，在相同色谱条件下分别进行高效液相色谱检测，根据检测结果计算出所述待测样品1、2的虫草素含量。检测结果表明，虫草素在0.02‑0.1mg/mL范围内具有良好的线性关系，回归方程为Y＝27692919.69X‑135695.5252(R²＝0.999728197)；待测样品1虫草素的含量为70.39mg/L，待测样品2虫草素的含量为1080.20mg/L。该方法具有分析速度快、灵敏度高、选择性化、操作方便等优点。

技术领域

本发明涉及一种检测蛹虫草中虫草素含量的方法，特别涉及一种利用高效液相色谱检测蛹虫草在液体发酵后得到的发酵液中胞内、外虫草素的含量的方法。

背景技术

蛹虫草(Cordyceps militaris)又名北冬虫夏草，为子囊菌门，肉座目，麦角菌科、虫草属真菌，由子座(子实体)和菌核组成的复合体。虫草素是蛹虫草中重要的活性成分之一，具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗氧化、免疫调节等生物活性。蛹虫草与冬虫夏草的功效相似，且虫草素的含量高于冬虫夏草。鉴于虫草素重要的食药用价值和巨大的应用前景，可作为冬虫夏草良好的替代品。

虫草素主要有三种生产方法，一种是传统的从蛹虫草、冬虫夏草等虫草类中提取，该方法受地域、气候影响比较大，且产量不高；二是通过化学全合成获得，此方法合成过程复杂、成本高且释放有机试剂；三是采用基因工程技术通过微生物发酵获得。目前，人工栽培蛹虫草技术已十分成熟，主要通过固体发酵和液体发酵。

虫草素是蛹虫草质量评价的重要指标之一，目前，虫草素含量的检测方法有紫外分光光度计法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、薄层色谱法等。因此，快速有效地检测虫草素含量对指导蛹虫草液体发酵工艺具有重要的指导意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测蛹虫草中虫草素含量的方法。它相对于传统检测方法，灵敏度高、选择性好、能够准确地检测蛹虫草中虫草素含量的分析方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种检测蛹虫草中虫草素含量的方法，所述方法为：

(1)标准曲线：制备五个不同浓度(优选梯度浓度，更优选0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL)的虫草素标准品进行高效液相色谱检测，以所述五个不同浓度溶度为横坐标，所述虫草素标准品的峰面积为纵坐标，进行线性拟合，得到标准曲线；绘制虫草素标准曲线；

(2)分别收集蛹虫草发酵液中蛹虫草的菌丝体和发酵上清液，所述蛹虫草的菌丝体烘干后加去离子水75-85℃提取2.5～3h(80℃提取3h)，所得提取液离心，所得上清液浓缩(减压蒸馏)或加水稀释，0.45μm滤膜过滤，检测，至峰面积在步骤(1)中最大浓度与最小浓度的峰面积之间，得到待测品1；所述发酵上清液加水稀释后过0.45μm微孔滤膜，得到待测品2；

(3)将步骤(2)中获得的待测品1或待测品2，在与步骤(1)相同的色谱条件下分别进行高效液相色谱检测，根据步骤(1)中所述标准曲线及所述待测样品1、2的峰面积，计算出待测品1或待测品2的浓度，进而根据步骤(2)中浓缩或稀释倍数，计算出单位体积的所述蛹虫草发酵液中蛹虫草的菌丝体和发酵上清液中虫草素的含量。

优选地，所述步骤(1)中虫草素标准品溶液的制备方法为：精密称取虫草素标准品2.5mg，用去离子水溶解，定容至25mL，配成溶度为0.10mg/mL的虫草标准品储备液，4℃储存备用，取标准品储备液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分别用去离子水稀释定容至10mL，0.45μm微孔滤膜过滤,最终虫草素标准品溶液的系列溶度为0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL。其中，虫草素标准品为阿拉丁公司产品，产品目录号C110081。