[发明专利]一种检测蛹虫草中虫草素含量的方法

权利要求书

1.一种检测蛹虫草中虫草素含量的方法，其特征在于所述方法为：

(1)标准曲线：制备五个不同浓度的虫草素标准品进行高效液相色谱检测，以所述五个不同浓度溶度为横坐标，所述虫草素标准品的峰面积为纵坐标，进行线性拟合，得到标准曲线；绘制虫草素标准曲线；

(2)分别收集蛹虫草发酵液中蛹虫草的菌丝体和发酵上清液，所述蛹虫草的菌丝体烘干后加去离子水75-85℃提取2.5～3h，所得提取液离心，所得上清液浓缩或加水稀释，0.45μm滤膜过滤，检测，至峰面积在步骤(1)中最大浓度与最小浓度的峰面积之间，得到待测品1；所述发酵上清液加水稀释后过0.45μm微孔滤膜，得到待测品2；

(3)将步骤(2)中获得的待测品1或待测品2，在与步骤(1)相同的色谱条件下分别进行高效液相色谱检测，根据步骤(1)中所述标准曲线及所述待测样品1、2的峰面积，计算出待测品1或待测品2的浓度，进而根据步骤(2)中浓缩或稀释倍数，计算出单位体积的所述蛹虫草发酵液中蛹虫草的菌丝体和发酵上清液中虫草素的含量。

2.如权利要求1所述的检测蛹虫草中虫草素含量的方法，其特征在于：步骤(1)中所述五个不同浓度依次为0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL。

3.如权利要求1所述的检测蛹虫草中虫草素含量的方法，其特征在于：步骤(1)和(3)所述的高效液相色谱条件如下：紫外检测波长260nm，流动相甲醇25mL：水75mL，流速1.0mL/min,进样量5μL；色谱柱为E clipse Plus C18，购自Agilent公司。

4.如权利要求1所述的检测蛹虫草中虫草素含量的方法，其特征在于：步骤(2)中所述蛹虫草的菌丝体和发酵上清液是通过将蛹虫草的发酵液常温10000r/min离心10min,所得上清为所述发酵上清液，所得沉淀用蒸馏水重复洗涤三次后60℃干燥至恒重，得所述菌丝体。

5.如权利要求1所述的检测蛹虫草中虫草素含量的方法，其特征在于：步骤(2)中所述蛹虫草发酵液按以下方法制备：将蛹虫草种子液接种至含100μg/mL头孢菌素的液体发酵培养基中，25℃恒温，150rpm条件下培养9d,获得蛹虫草的发酵液；其中液体发酵培养基各组分终浓度为：可溶性淀粉25g/L，蛋白胨20g/L，KH₂PO₄ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1g/L，L-甘氨酸3g/L，溶剂为蒸馏水，pH自然；所述蛹虫草种子液的接种体积为液体发酵培养基的5％。

6.如权利要求4所述的检测蛹虫草中虫草素含量的方法，其特征在于：所述蛹虫草种子液的制备方法是将原始母种在无菌条件下接种至含200μg/mL头孢菌素的种子液培养基中，25℃恒温，150rpm条件下培养5d,获得蛹虫草的种子液；其中种子液培养基各组分终浓度为：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，K₂HPO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，L-甘氨酸1g/L混合，溶剂为蒸馏水，pH自然。

7.如权利要求1所述的检测蛹虫草中虫草素含量的方法，其特征在于：步骤(2)中所述浓缩以减压蒸馏的方式浓缩。

8.如权利要求1所述的检测蛹虫草中虫草素含量的方法，其特征在于：步骤(2)中提取为80℃提取3h。