[发明专利]一种功能性树枝状DNA、基于该树枝状DNA的纳米传感探针及该纳米传感探针的应用

权利要求书

1.一种功能性树枝状DNA，其特征在于：由Y0、Y1、Y2、Y3、Y4、Y4l这6种DNA的Y型结构按照摩尔比1Y0:3Y1:6Y2:12Y3:(23Y4+1Y4l)依次混合反应制备得到；其中，Y0由如下核苷酸序列的Y0a、Y0b、Y0c等摩尔比混合反应制备得到，Y1由如下核苷酸序列的Y1a、Y1b、Y1c等摩尔比混合反应制备得到，Y2由如下核苷酸序列的Y2a、Y2b、Y2c等摩尔比混合反应制备得到，Y3由如下核苷酸序列的Y3a、Y3b、Y3c等摩尔比混合反应制备得到，Y4由如下核苷酸序列的Y4a、Y4b、Y4c等摩尔比混合反应制备得到，Y4l由如下核苷酸序列的Y4a、Y4b、Y4p等摩尔比混合反应制备得到；

2.一种基于权利要求1所述功能性树枝状DNA的纳米传感探针，其特征在于：在树枝状DNA的Y4a与Y3a、Y3b形成的G四链体结构上结合血红素hemin形成DNA酶DNAzyme，在树枝状DNA的Y4b、Y4c末端标记氨基上结合银纳米粒子AgNPs。

3.一种权利要求2所述纳米传感探针的制备方法，其特征在于：常温下，取过量1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺将AgNPs的羧基活化1h，取1.0mLAgNPs，用0.4M NaOH调节溶液pH为9.0，缓慢加入640μL 170.2nM所述功能型树枝状DNA，不断搅拌，混合孵育18h；随后，将10μL 10μM SH-A15加入溶液，封闭2h；将122μL 0.01MPBS加入到溶液中继续反应6h，接着缓慢加入21μL 2M NaCl，3h后重复该步骤，12h后缓慢加入26μL 2M NaCl，3h后重复该步骤，使AgNPs能够耐盐而不改光学性质，继续反应48h；未组装的DNA通过离心除去，沉淀溶于1.0mL 20mM KCl与200mM NaCl的混合溶液；最后加入一定量的hemin，常温避光搅拌反应2h以形成hemin/G四链体DNA酶；未组装的DNA和过量的hemin通过离心除去，弃去上清液，沉淀溶于1.0mL 20mM KCl与200mM NaCl的混合溶液，使用前在4℃暗处保存。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述银纳米粒子通过如下方法制备：在柠檬酸三钠存在时，使用还原剂NaBH₄来还原AgNO₃生成银纳米粒子。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，银纳米粒子具体制备方法为：10mL1mMAgNO₃逐滴加入冰浴的30mL 2.0mM NaBH₄和2mL 34mM柠檬酸三钠中，室温下搅拌反应30min至溶液呈亮黄色，使用前在4℃暗处保存。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：离心除去未组装的DNA的离心参数为15000rpm、15min、14℃；离心除去未组装的DNA和过量的hemin的离心参数为15000rpm、15min、4℃。

7.权利要求2所述的纳米传感探针在制备检测心血管疾病多组分生物标志物的化学发光免疫检测试剂方面的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，所述生物标志物包括肌钙蛋白T和糖类蛋白125。

9.权利要求2所述的纳米传感探针在制备对细胞内相关蛋白进行化学发光成像的试剂方面的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，所述细胞内相关蛋白包括萤火虫荧光素酶。