[发明专利]一种内皮祖细胞外泌体医用敷料、制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种内皮祖细胞外泌体医用敷料、制备方法及其应用，包括以下步骤：三维培养得到内皮祖细胞、采用内皮祖细胞制备外泌体、通过外泌体得到外泌体医用敷料。本发明所述的内皮祖细胞外泌体医用敷料，以健康的脐带血内皮祖细胞为原料，经过严格和安全的制备，包含高活力的外泌体，纳米级的磷脂囊泡中包裹着和细胞生长、修复等功能密切相关的数百种蛋白质和microRNA等生物活性分子，通过激活患者机体的内源性组织特异性干细胞、建立组织损伤修复的再生微环境，促进糖尿病足、褥疮、烧伤、烫伤等疾病的伤口组织修复，以及利器、工具等造成的各类战创伤的现场救治和伤口处理。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种内皮祖细胞外泌体医用敷料、制备方法及其应用。

背景技术

糖尿病在全世界范围内的高发，也伴随着糖尿病并发症等严重的问题，严重影响患者的健康和生活质量。糖尿病伤口愈合是临床治疗中的难题之一。通过生物活性敷料递送多种类型的干细胞和内皮祖细胞衍生的外泌体，是糖尿病伤口修复的一种潜在策略。

高血糖引起的微血管功能障碍是导致糖尿病并发症的主要原因之一，造成缺血以及伤口愈合速度减慢。一般来说，伤口愈合经历三个典型的阶段，包括炎症、增殖和基质重塑，这些需要血管为创伤修复提供营养和氧气支持。因此，改善糖尿病患者伤口的血管生成和血运重建对于加速伤口愈合至关重要。

糖尿病性伤口的传统临床治疗方法包括控制血糖、手术清创、血运重建和创伤敷料，而血管生成及其血运重建决定了手术成功和后期愈合情况。通常，生长因子治疗如碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子能帮助血管生成以及糖尿病伤口愈合更快。然而，生长因子的递送、剂量和价格是其应用的障碍。因此，迫切需要新的策略和产品通过促进伤口组织中的血管生成来治疗糖尿病伤口。

研究表明，来自间充质干细胞的外泌体有助于糖尿病足和褥疮等病症的伤口愈合。间充质干细胞衍生的外泌体是纳米级细胞外囊泡，具有与间充质干细胞类似的有益功能。此外，与间充质干细胞相比，外泌体显示出一些独特的优势，例如免疫原性低、稳定性高、易于储存。很多研究也证实了使用外泌体作为伤口愈合疗法的潜力，例如，与骨髓来源的间充质干细胞相比，脂肪来源的间充质干细胞具有特殊的优势，如易于获得和丰富的来源，能够通过优化成纤维细胞的功能加速皮肤伤口愈合。

然而，外泌体由于其在体内快速清除和相对较短的体内半衰期，将外泌体应用于伤口愈合仍然面临挑战。此外，由于组织再生过程通常需要很长时间，在此期间游离外泌体的存活率得不到保证。因此，开发一种能够维持外泌体活性以及持续释放的生物相容性外泌体医用敷料，将对外泌体治疗伤口愈合是至关重要的。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种内皮祖细胞外泌体医用敷料、制备方法及其应用，以刺激患者机体的内源性干细胞，加速糖尿病足、褥疮、烧伤、烫伤、切割伤、擦伤或战创伤的伤口组织修复及提高伤口愈合质量的应用。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种内皮祖细胞外泌体医用敷料的制备方法，包括以下步骤：

a.三维培养得到内皮祖细胞；

b.采用含无外泌体血清的培养基培养步骤a中得到的内皮祖细胞，得到上清液，将上清液通过差速离心后制备外泌体；

c.在聚己内酯高分子膜复合层表面涂覆一层步骤b中得到的外泌体及一层水凝胶溶液后静置，凝固后得到外泌体医用敷料，或将步骤b中得到的外泌体制成外泌体冻干粉，将外泌体冻干粉与纯化水和/或透明质酸钠混合后得到喷剂型外泌体医用敷料。

优选的，步骤a中三维培养的具体步骤包括：

(1)将人脐带血来源的内皮祖细胞使用完全培养基接种至培养瓶中，并使内皮祖细胞密度达到90％，得到原代内皮祖细胞；