[发明专利]检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器的制备方法，包括如下步骤：(1)对裸金电极进行前处理；(2)将CMK‑3滴加到处理好的裸金电极表面，干燥；(3)在上述电极表面滴加AuNPs胶体溶液，干燥；(4)然后将捕获抗体Ab1溶液滴加到步骤(3)得到的电极表面，置于温度为37℃下孵育2h；(5)将牛血清白蛋白溶液滴加到步骤(4)得到的电极表面，在温度为37℃下孵育10‑50min；(6)模拟加样，将8μL不同浓度梯度的cTnI溶液滴加到步骤(5)得到的电极表面，在温度为37℃下孵育1h；(7)最后将PdPt‑PMB‑Ab2结合物滴加到步骤(6)得到的电极表面，在温度为37℃下孵育1h，在目标物cTnI存在下，由Ab1、cTnI和PdPt‑PMB‑Ab2组成的三明治型免疫复合物，即可。

技术领域

本发明属于心肌肌钙蛋白I快速检测技术领域，具体涉及一种检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器及其制备方法与应用。

背景技术

急性心肌梗死(AMI)是临床常见的心血管疾病之一，被认为是心血管疾病患者死亡的主要原因。AMI发病后1-3小时是溶栓和介入治疗的“黄金”窗口，这意味着早期AMI的快速诊断是治疗的关键。传统的AMI诊断主要依靠心绞痛症状、心电图和生物标志物检测，其中生物标志物检测非典型心肌梗死表现(即没有胸痛或没有心电图ST段抬高)的患者的鉴别尤为重要。心肌肌钙蛋白I(cTnI)被认为是AMI早期诊断的金标准，它具有很高的心肌组织特异性和临床敏感性，甚至可以反映微小区域的心肌缺血或坏死。健康人的cTnI浓度通常低于0.4ng mL-1，而高于2.0ng mL-1的水平意味着未来可能发生严重心脏事件的风险增加。

目前，已有多种检测方法用于检测血液标本中cTnI的水平，包括酶联免疫吸附法、电化学发光免疫法、化学发光免疫法和荧光免疫法等。但这些方法存在实验周期长、实验操作复杂、灵敏度低等局限性，在这种情况下，电化学免疫传感器因其操作方便、样品消耗少、响应速度快、灵敏度高、成本低等优点越来越受到人们的重视。三明治型电化学免疫传感器作为电化学免疫传感器的一个分支，在一些文献中已发展出利用纳米材料检测cTnI浓度的方法。然而，纳米材料的合成通常需要多步或苛刻的条件，如高温、高压等。因此，为了填补这一空白，急需提供一种新型电化学免疫传感器用于cTnI的检测。

发明内容

针对现有技术中存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器，该免疫传感器是由CMK-3@AuNPs和PdPt-PMB纳米复合材料制备而成，该检测方法灵敏度高，实验周期短，实验操作简单。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器的制备方法，包括如下步骤：

(1)对裸金电极进行前处理；

(2)将8μL浓度为1mg mL^-1的CMK-3滴加到处理好的裸金电极表面，并在室温下干燥4h；

(3)在上述电极表面滴加8μL的AuNPs胶体溶液，并在室温下干燥2h；

(4)然后将8μL，浓度为25μg mL^-1的捕获抗体Ab1溶液滴加到步骤(3)得到的电极表面，放置于温度为37℃下孵育2h；

(5)将8μL，质量分数为0.25％的牛血清白蛋白溶液滴加到步骤(4)得到的电极表面，在温度为37℃下孵育10-50min；

(6)模拟加样，将8μL不同浓度梯度的cTnI溶液滴加到步骤(5)得到的电极表面，并在温度为37℃下孵育1h，使目标蛋白cTnI与修饰电极上的Ab1通过抗原-抗体反应结合；

(7)最后将8μL的PdPt-PMB-Ab2结合物滴加到步骤(6)得到的电极表面，在温度为37℃下孵育1h，在目标物cTnI存在下，通过抗原-抗体反应形成由Ab1、cTnI和PdPt-PMB-Ab2组成的三明治型免疫复合物，即可。