[发明专利]检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器的制备方法，包括如下步骤：

(1)对裸金电极进行前处理；

(2)将8μL浓度为1mg mL^-1的CMK-3滴加到处理好的裸金电极表面，并在室温下干燥4h；

(3)在上述电极表面滴加8μL的AuNPs胶体溶液，并在室温下干燥2h；

(4)然后将8μL，浓度为25μg mL^-1的捕获抗体Ab1溶液滴加到步骤(3)得到的电极表面，放置于温度为37℃下孵育2h；

(5)将8μL，质量分数为0.25％的牛血清白蛋白溶液滴加到步骤(4)得到的电极表面，在温度为37℃下孵育10-50min；

(6)模拟加样，将8μL不同浓度梯度的cTnI溶液滴加到步骤(5)得到的电极表面，并在温度为37℃下孵育1h，使目标蛋白cTnI与修饰电极上的Ab1通过抗原-抗体反应结合；

(7)最后将8μL的PdPt-PMB-Ab2结合物滴加到步骤(6)得到的电极表面，在温度为37℃下孵育1h，在目标物cTnI存在下，通过抗原-抗体反应形成由Ab1、cTnI和PdPt-PMB-Ab2组成的三明治型免疫复合物，即可。

2.根据权利要求1所述的检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述AuNPs胶体溶液的制备方法如下：

(a1)首先，将100mL，质量分数为0.01％的HAuCl₄溶液在连续搅拌下加热至沸腾15min；

(a2)然后将1mL，质量分数为2％的新鲜制备的柠檬酸三钠溶液逐滴滴加至上述溶液中，继续搅拌15min，观察到溶液颜色由淡黄色变为酒红色，即可；

(a3)冷却至25℃后，将上述AuNPs胶体溶液在4℃下储存到棕色烧瓶中，以备后续使用。

3.根据权利要求1所述的检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述PdPt-PMB-Ab2结合物的制备方法如下：

(b1)首先将0.1M，600μL的HCl和1.14mM，6mL的DTAB加入到9.8mM，0.5mL的MB溶液中，剧烈搅拌10min后形成胶束混合物；

(b2)然后将4wt％，100μL的H₂PdCl₄和4wt％，100μL的H₂PtCl₆加入至上述混合物中，并在室温下连续搅拌8h，得到PdPt-PMB复合材料，并在转速为8000rpm下离心10min后，洗涤；

(b3)将上述PdPt-PMB复合材料重新分散于10mM，2mL的PBS中，然后在温度为4℃下避光保存；

(b4)将200μL上述PdPt-PMB复合材料与4-12μL的检测抗体Ab2混合，并在温度为4℃下进行搅拌12h，离心和洗涤；

(b5)最后，将上述PdPt-PMB-Ab2悬浮于10mM，1mL的PBS中，并保存在温度为4℃下的黑暗环境中以备日后使用。

4.根据权利要求3所述的检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述PBS的pH值为4.5-8。

5.根据权利要求3所述的检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述Ab2的体积为10μL。

6.根据权利要求1所述的检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器的制备方法，其特征在于，在步骤(5)中所述cTnI溶液的浓度分别为0ng/mL、0.001ng/mL、0.01ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL和10ng/mL。

7.一种检测心肌肌钙蛋白I的免疫传感器，采用权利要求1-6任一所述的制备方法制得。

8.根据权利要求7所述的免疫传感器在定量检测心肌肌钙蛋白I中的应用。