[发明专利]一种甘露糖酶基因VbMan26A、重组质粒、重组菌株、甘露糖酶及其应用

说明书

本发明公开一种甘露糖酶基因VbMan26A、重组质粒、重组菌株、甘露糖酶及其应用，其中，所述甘露糖酶基因VbMan26A用于编码甘露糖酶，所述甘露糖酶基因VbMan26A的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，编码所得的甘露糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明提供的甘露糖酶基因VbMan26A，由其编码所得甘露糖酶在的低温和碱性条件下均具有高活性，能够有效的将甘露聚糖水解为2～3个残基的甘露寡糖，可适用于制备益生素甘露寡糖，也可用于制备洗涤用品。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种甘露糖酶基因VbMan26A、重组质粒、重组菌株、甘露糖酶及其应用。

背景技术

半纤维素是自然界中第二大丰富的碳水化合物，其主要存在于植物细胞壁中。半纤维素具有多种存在形式，主要有木聚糖、阿拉伯木聚糖、葡萄糖甘露聚糖、半乳葡萄甘露聚糖等。内切型甘露糖酶是最为重要的一种(内切型甘露糖酶通常被称为甘露糖酶)降解甘露聚糖的酶类。甘露糖酶随机切割甘露聚糖主链上的β-1,4糖苷键，将甘露聚糖水解为甘露寡糖。甘露糖酶在半纤维多聚糖资源的利用及工业应用方面有巨大潜力。

由于蛋白质序列的差异，来自不同微生物的甘露糖酶往往具有不同的酶学性质，例如，不同的反应温度和pH，不一样的温度、酸碱度以及盐度的耐受性，以及不同的产物类型(产物为不同长度的甘露寡糖)等，但是在低温、碱性下具有高活性的甘露糖酶较为少见。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种甘露糖酶基因VbMan26A、重组质粒、重组菌株、甘露糖酶及其应用，旨在提供一种在低温、碱性下具有高活性的甘露糖酶。

为实现上述目的，本发明提出一种甘露糖酶基因VbMan26A，用于编码甘露糖酶，所述甘露糖酶基因VbMan26A的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提出一种甘露糖酶，所述甘露糖酶由如上所述的甘露糖酶基因VbMan26A编码所得，且所述甘露糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提出一种重组质粒，所述重组质粒包括如上所述的甘露糖酶基因VbMan26A。

可选地，所述重组质粒还包括表达载体pET-28a。

本发明还提出一种重组菌株，所述重组菌株包括如上所述的甘露糖酶基因VbMan26A。

可选地，所述重组菌株的宿主细胞为大肠杆菌。

进一步地，本发明还提出一种制备益生素甘露寡糖的方法，包括以下步骤：采用如上所述的甘露糖酶水解甘露聚糖，得到益生素甘露寡糖。

可选地，所述甘露聚糖包括魔芋精粉、刺槐豆胶和象牙果甘露糖中的任意一种。

更进一步地，本发明还提出一种如上所述的甘露糖酶在制备洗涤用品中的应用。

本发明提供的甘露糖酶基因VbMan26A，由其编码所得甘露糖酶在的低温和碱性条件下均具有高活性，能够有效的将甘露聚糖水解为2～3个残基的甘露寡糖，可适用于制备益生素甘露寡糖，也可用于制备洗涤用品。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为实施例4制备的甘露糖酶中，甘露糖酶基因VbMan26A的蛋白表达分析结果图；

图2为实施例4制备的甘露糖酶在不同pH值条件下的相对酶活；

图3为实施例4制备的甘露糖酶的pH稳定性分析结果图；