[发明专利]一种提取蚯蚓血红蛋白的方法在审
| 申请号： | 202110302955.2 | 申请日： | 2021-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN113024664A | 公开（公告）日： | 2021-06-25 |
| 发明（设计）人： | 荣龙;余春红;逄冠翔 | 申请（专利权）人： | 北京航空航天大学 |
| 主分类号： | C07K14/805 | 分类号： | C07K14/805;C07K1/14;C07K1/30 |
| 代理公司： | 北京科迪生专利代理有限责任公司 11251 | 代理人： | 张乾桢;邓治平 |
| 地址： | 100191*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提取 蚯蚓血红蛋白 方法 | ||
1.一种提取蚯蚓血红蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)取保存于-70℃冰箱中的吐沙洗净后的蚯蚓，置于冷水浴中隔水解冻；
(2)待蚯蚓块解冻至软化时，将其用剪刀预先剪碎成小块，装入不锈钢容器中；
(3)容器中加入预冷的二蒸水，调节蚯蚓与二蒸水的质量比例为1：1～3；
(4)将不锈钢容器放置在闪式提取仪的指定部位，开动机器进行闪式提取，得到粗提蚯蚓液；
(5)将粗提蚯蚓液置于高速离心机中，以10000rpm的转速，4℃的温度，离心30min，取上清液为瑰红色的无杂质的均一液体；
(6)取粗提蚯蚓液的上清液，按一定比例加入预先调配好的聚乙二醇溶液与硫酸铵溶液，涡旋振荡，得到有絮状沉淀的混合液；
(7)将混合液置于离心机中，以5000rpm的转速，4℃的温度，离心10min，去除上清液，用二蒸水小心清洗沉淀上的残留的液体；
(8)将沉淀用与步骤(6)中混合液中加入的蚯蚓上清液等体积的二蒸水复溶，得到均一稳定的蚯蚓血红蛋白溶液；
(9)将蚯蚓血红蛋白溶液透析脱盐后放入冷冻干燥机中，冷冻干燥12-24小时后，得到纯净的蚯蚓血红蛋白干粉。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中蚯蚓与二蒸水的质量比例为1：1.5。
3.根据权利要求1-2任一所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中闪式提取共进行1～3次，每次提取持续25～40s，每次提取间隔为5～15s；优选地，闪式提取进行2次，每次提取持续30s，每次提取间隔为10s。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中预先调配好的聚乙二醇溶液的质量分数为40％，硫酸铵溶液的质量分数为40％。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中与粗提蚯蚓上清液混合后聚乙二醇的终质量分数范围为11～19％，硫酸铵的终质量分数范围为4～8％。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇的终质量分数范围为14～16％，硫酸铵的终质量分数范围为5～7％。
7.根据权利要求5-6任一所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇的终质量分数范围为15％，硫酸铵的终质量分数范围为6％。
8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中，聚乙二醇的聚合度可为2000或4000或6000，优选地，聚合度为4000。
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