[发明专利]一种细胞表面脆弱微生物的核酸富集方法及在高通量测序中的应用

权利要求书

1.一种细胞表面脆弱微生物的核酸富集方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S1、检测受试者样品中细胞表面脆弱微生物：采用检测受试者样品中细胞表面脆弱微生物的高通量测序检测方法测受试者样品中细胞表面脆弱微生物；

步骤S2、样本制备：选取核酸提取样本，然后依次进行采用裂解试剂对临床样本中宿主细胞裂解、宿主核酸去除、细胞表面脆弱微生物裂解及核酸提取；其中宿主核酸去除试剂成分为TURBO^TMDNase(2U/μL)1-5μL；细胞表面脆弱微生物裂解及核酸提取是采用QIAamp UCPPathogen Mini Kit或其它具有相似功能的试剂盒完成的；

步骤S3、微生物DNA进行文库构建并进行测序；

步骤S4、数据分析和出具报告。

2.根据权利要求1所述的一种细胞表面脆弱微生物的核酸富集方法，其特征在于，步骤S1中所述检测受试者样品中细胞表面脆弱微生物的高通量测序检测方法，包括如下步骤：

步骤C1：提取受试者样品中细胞表面脆弱微生物的DNA；

步骤C2：将步骤S1所得微生物DNA进行文库构建并进行测序；

步骤C3：对步骤S2的测序数据进行数据库中的生物信息学分析，判断是否有微生物序列存在，从而判断患者是否感染该种微生物。

3.根据权利要求1所述的一种细胞表面脆弱微生物的核酸富集方法，其特征在于，步骤S2中所述核酸提取样本，包括外周血、肺泡灌洗液、脑脊液、痰液中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的一种细胞表面脆弱微生物的核酸富集方法，其特征在于，步骤S2中所述裂解试剂成分为：0.5％～2％β-辛基硫代葡萄糖苷+0.5％～2％β-十二烷基麦芽糖苷。

5.根据权利要求1所述的一种细胞表面脆弱微生物的核酸富集方法，其特征在于，步骤S2中所述裂解试剂成分为：1％β-辛基硫代葡萄糖苷+1％β-十二烷基麦芽糖苷。

6.根据权利要求1所述的一种细胞表面脆弱微生物的核酸富集方法，其特征在于，步骤S3中所述微生物DNA进行文库构建并进行测序，具体为：将制备好的核酸进行文库构建；文库构建包括核酸片段化、加接头、文库扩增等流程；文库构建可通过Illumina平台、Iontorrent平台或其它具有相同/似功能的高通量测序平台均可；再照Illumina平台、Iontorrent平台或其它具有相同/似功能的高通量测序平台的说明书进行操作上机测序。

7.根据权利要求1所述的一种细胞表面脆弱微生物的核酸富集方法，其特征在于，步骤S4中所述数据分析和出具报告包括测序数据质量的评估、去除宿主序列、与微生物数据库进行比对、阳性微生物物种判读和出具报告。

8.一种权利要求1-7任一项所述细胞表面脆弱微生物的核酸富集方法在高通量测序中的应用。