[发明专利]基于拉曼光谱的多药耐药抑制剂筛选方法

权利要求书

1.一种基于拉曼光谱的多药耐药抑制剂筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备SERS基底；

2)在SERS基底上偶联多药耐药蛋白；

3)在偶联有多药耐药蛋白的SERS基底上随机选择多个点进行拉曼信号检测，计算多个点的平均拉曼强度值作为拉曼标准值；

4)将待检测的多药耐药抑制剂与步骤3)中的偶联有多药耐药蛋白的SERS基底共孵育，清洗后再检测偶联有多药耐药蛋白的SERS基底的拉曼强度，并与步骤3)得到的拉曼标准值进行比较，从而判断待检测的多药耐药抑制剂的抑制效果；

所述步骤1)具体包括：

1-1)对硅片进行预处理：将硅片用无水乙醇冲洗、吹干后置于体积比为3：1的H₂SO₄和H₂O₂的混合溶液中清洗，再分别用去离子水、超纯水冲洗，N₂吹干；清洗后的硅片在室温下完全浸润在含有3-氨丙基三乙氧基硅烷的甲醇溶液中，然后依次用甲醇和纯水超声清洗，并用氮气干燥；

1-2)在预处理后的硅片上通过热蒸发法沉积金膜：以1×10^-6mbar的压力、0.3-0.4nm/s速度在预处理后的硅片上沉积金膜，蒸发后，在恒定的氩气流动下退火，得到沉积有金膜的硅片；用巯基乙胺的乙醇溶液对硅片上的金膜进行修饰；将预先制备好地金纳米粒子洗涤后重悬在纯水中得到金纳米粒子溶液，将修饰有巯基乙胺的硅片浸润在金纳米粒子溶液中，反应结束后，将硅片用纯水洗涤并用氮气干燥，制得SERS基底；

所述步骤2)具体包括：将步骤1)制备的SERS基底浸入到十一巯基十一烷酸的乙醇溶液中，6-12小时后取出，乙醇清洗后氮气吹干，再浸入EDC与NHS的混合液中反应15分钟，取出清洗后加入到多药耐药蛋白溶液中反应1小时，之后用PBS缓冲液清洗，得到偶联有多药耐药蛋白的SERS基底；

所述步骤4)具体包括：将待检测的多药耐药抑制剂与步骤3)中的偶联有多药耐药蛋白的SERS基底共孵育，磷酸缓冲液清洗后再检测偶联有多药耐药蛋白的SERS基底的拉曼强度R，并在拉曼强度R中扣除步骤3)获得的拉曼标准值，若扣除后的结果中出现新的拉曼峰则代表待检测的多药耐药抑制剂对多药耐药蛋白具有抑制效果，且多药耐药抑制剂的抑制效果与新的拉曼峰的拉曼强度的大小呈正相关关系；若不会出现新的拉曼峰，则表明待检测的多药耐药抑制剂对多药耐药蛋白不具有抑制效果。

2.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱的多药耐药抑制剂筛选方法，其特征在于，所述多药耐药蛋白为Pgp、Mrp1、Bcrp或Bsep。

3.根据权利要求2所述的基于拉曼光谱的多药耐药抑制剂筛选方法，其特征在于，所述多药耐药蛋白为Pgp，且所述步骤2)中Pgp溶液的浓度为0.1mg/ml。

4.根据权利要求3所述的基于拉曼光谱的多药耐药抑制剂筛选方法，其特征在于，所述步骤4)中待检测的多药耐药抑制剂与偶联有多药耐药蛋白的SERS基底共孵育的时间不小于1小时。

5.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱的多药耐药抑制剂筛选方法，其特征在于，所述步骤3)和步骤4)中，进行拉曼信号检测使用的激光波长为650nm，最大激发功率为10mW。

6.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱的多药耐药抑制剂筛选方法，其特征在于，所述SERS基底上的金膜的厚度为40nm，所述步骤1-2)中的金纳米粒子溶液的浓度为100mg/L，其中的金纳米粒子的直径小于10nm。