[发明专利]一种检测肌苷酸的酶生物传感器、其制备方法和应用

权利要求书

1.检测肌苷酸的自组装ZIF-67@AgNPs-鲁米诺双酶电化学发光传感器，其特征在于，其线性检测范围为0.001~25 g/L，由参比电极、对电极和修饰电极组成，将AgNPs固定在MOF材料ZIF-67上，采用十二面体结构分散AgNPs粒子，防止纳米AgNPs粒子团聚，同时利用ZIF-67超大的比表面积和生物相容性，固定化两种水解酶(5'-核苷酸酶和黄嘌呤氧化酶)对IMP进行水解，通过两步酶解反应得到的H₂O₂显著放大了鲁米诺-H₂O₂体系的ECL信号，ZIF-67和AgNPs两种催化材料的结合，双酶两步水解法的应用使ECL信号更明显，检出限更高。

2.如权利要求1所述的检测肌苷酸的双酶传感器，其特征在于，所述5'-核苷酸酶溶液由5'-核苷酸酶溶于pH 7.4、0.01M的PBS溶液得到；所述黄嘌呤氧化酶溶液由黄嘌呤氧化酶溶于pH 7.4、0.01M的PBS溶液得到。

3.如权利要求1所述的检测肌苷酸的双酶传感器，其特征在于，所述ZIF-67制备方法：将用分析天平称取249.0 mg Co(NO₃)₂·6H₂O和996.0 mg 2-甲基咪唑，然后溶解在25.0 mL甲醇中，然后将2-甲基咪唑溶液倒入Co(NO₃)₂·6H₂O溶液中制备ZIF-67前驱体溶液，室温静置24小时，最后，用离心机对混合溶液进行离心，得到紫色沉淀，将沉淀用甲醇洗涤多次，80℃真空干燥，得到紫色的ZIF-67样品：

AgNPs制备方法：使用硼氢化钠还原硝酸银制备纳米银，准备100毫升0.01M硝酸银溶液和100毫升0.01M柠檬酸钠溶液，混合，加入470毫升超纯水，同时快速搅拌，添加60毫升0.01M NaBH₄于混合溶液中，搅拌30分钟，使用前在4℃冰箱老化2天，将得到的溶液离心，用超纯水洗涤沉淀多次，真空干燥得到纳米银粉末；

ZIF-67@AgNPs-鲁米诺混合溶液的制备方法为：取20 mg ZIF-67粉末，悬浮于9.5 ml超纯水中，加入AgNPs粉5 mg，鲁米诺粉5 mg，搅拌后加入ZIF-67，将溶液的pH调至7.4后，搅拌30分钟。

4.如权利要求1所述的检测肌苷酸的双酶传感器，其特征在于，所述工作电极为铂电极，所述参比电极为Ag/AgCl电极，所述对电极为铂电极。

5.如权利要求1所述的检测肌苷酸的双酶传感器，其特征在于，所述双酶电化学发光传感器为0.0013g/L。

6.权利要求1~5任一项所述双酶传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对工作电极进行表面预处理；

（2）将所述复合溶液a滴加到步骤（1）表面预处理后的工作电极表面，室温晾干；

（3）将双酶复合溶液b混合物滴加到步骤（2）处理后的电极表面，室温晾干；

（4）将所述牛血清白蛋白溶液滴加到步骤（3）处理后的电极表面，室温晾干，得到修饰电极；

（5）将步骤（4）所得修饰电极与所述参比电极和所述对电极组成三电极体系，即得；其中：所述复合溶液a、双酶复合溶液b和牛血清白蛋白溶液的滴加量体积比为1:1:1。

7.如权利要求6所述双酶电化学发光传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述工作电极表面预处理的步骤为：将工作电极依次使用0.3 μm和0.05 μm的氧化铝粉末在抛光布上抛光成镜面，再用超纯水冲洗，然后在超纯水中超声处理1min，然后置于铁氰化钾溶液中活化处理，取出，用超纯水冲洗，氮气吹干；其中，所述铁氰化钾溶液为由K₃[Fe(CN)₆]、K₄[Fe(CN)₆]和KCl按摩尔比为1:1:100组成的混合溶液。