[发明专利]一种知母均一多糖及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种知母均一多糖及其制备方法和应用。本发明首先将知母根茎粉粹、乙醇浸提脱脂；将脱脂的知母粉进行水提醇沉，Sevag法除蛋白，透析后冷冻干燥制得知母粗多糖；知母粗多糖复溶，采用梯度醇沉制得不同分子量组分的知母多糖，进一步采用纤维素DEAE‑Sepharose Fast Flow柱层析纯化，获得知母均一多糖AABP‑2B，其由甘露糖和葡萄糖组成。本发明的知母均一多糖具有良好的抗氧化和降血糖活性，有望开发成降血糖药物或保健品。此外，本发明纯化知母均一多糖的工艺简便，适用于工业化生产。

技术领域

本发明涉及植物活性成分分离纯化技术领域，特别是知母均一多糖及其制备方法与应用。

背景技术

知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge)，属于百合科多年生的直立草本植物，主要分布在中国，日本及其他东亚国家。知母根茎作为传统的中药材始载于《神农本草经》，具有滋阴降火，润燥滑肠等功效，广泛用于治疗发热、咳嗽、糖尿病等疾病。此外，在《中国药典》、《中药大辞典》、《中华本草》等经典的中药书籍中均对其药理活性有详细描述。同时，知母也被我国卫计委批准为“保健食品”类中药材。近年来，随着国内外众多学者对知母的深入研究，知母的药用价值逐渐被开发利用，目前发现知母具有改善阿尔兹海默症、降血糖、抗氧化及抗肿瘤等功效。多糖是知母的主要活性成分之一，已有研究表明知母粗多糖或知母水提液具有一定的降血糖功效，但是关于知母均一多糖的结构及其在治疗糖尿病的研究却鲜见报道。因此，有必要进一步探究知母多糖分离纯化方法及结构鉴定并探讨其降血糖作用，为知母多糖的开发利用提供基础。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种知母均一多糖。

本发明另一目的在于提供上述知母均一多糖的制备方法。

本发明再一目的是提供上述知母均一多糖的应用。

本发明的目的通过下述方案实现：

一种知母均一多糖，其分子量为4000-8000Da，由甘露糖和葡萄糖组成。

优选的，所述的知母均一多糖的分子量为5800Da，由摩尔比为0.72：0.28的甘露糖和葡萄糖组成。

上述的知母均一多糖，其结构式如下：

一种上述的知母均一多糖的制备方法，其包括以下步骤：

(1)将知母粉碎，过100目筛后用乙醇回流脱脂脱色，烘干；采用热水浸提法提取知母多糖，水提液浓缩后添加乙醇沉淀多糖，离心分离收集知母多糖沉淀物，并利用sevag法除蛋白，透析后冻干制得知母粗多糖；

(2)将知母粗多糖复溶于水中，添加乙醇至乙醇浓度为60％，静置，离心分离后收集上清液和沉淀，往上清液中添加乙醇直至乙醇浓度为80％，静置，离心分离得到的沉淀即为乙醇终浓度为80％时沉淀的知母多糖；

(3)将乙醇浓度为80％乙醇沉淀的知母多糖经DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析进一步纯化，依次采用纯水、0.1M NaCl、0.2M NaCl和0.5M NaCl溶液进行梯度洗脱，收集0.1M NaCl洗脱组分，从而获得知母均一多糖。

步骤(1)中所述的用乙醇回流脱脂脱色是指用质量分数为70～95％的乙醇对知母干粉进行回流脱脂脱色，回流后置于35-45℃的鼓风干燥箱中烘干；

步骤(1)中所述的热水浸提法是指在70～90℃的热水中浸提2～4次，每次1～3h；

步骤(1)中所述的水提液浓缩优选为浓缩至原体积的1/3～1/6；步骤(1)中所述的添加乙醇沉淀多糖优选为添加3～5倍量体积的无水乙醇，在4℃条件下静置12～48小时，离心分离，收集沉淀物；