[发明专利]一种牛支原体性小鼠乳腺炎模型的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种牛支原体性小鼠乳腺炎模型的构建方法及其应用。本发明提供了一种小鼠乳腺炎模型的构建方法，包括如下步骤：将感染液接种至泌乳期小鼠的乳腺；所述感染液是用无菌缓冲溶液悬浮牛支原体NMH7株得到的。具体的，接种方式可为通过小鼠乳导管接种。具体的，小鼠的乳腺为小鼠的第四对乳腺。本发明还保护N‑acetyl‑L‑cysteine在制备牛支原体奶牛乳房炎药物中的应用。本发明构建的模型，能够模拟临床上牛支原体奶牛乳房炎发生时，奶牛乳腺发生的病理变化，具有良好的可重复性和便捷性，具有良好的实际应用价值。

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，具体涉及一种牛支原体性小鼠乳腺炎模型的构建方法及其应用。

背景技术

牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)可引起牛发生乳房炎、肺炎、关节炎和中耳炎等多种疾病。奶牛乳房炎是由于病原微生物感染或其他物理化学刺激等因素引起奶牛乳腺出现红、肿、热、痛等炎症反应，是引起世界范围内奶牛业经济损失最严重的疾病。牛支原体性奶牛乳房炎可导致奶牛出现发热等全身症状，乳区局部可出现红肿热痛等炎症反应。牛支原体性奶牛乳房炎可导致牛奶产量急剧下降或停止产奶，奶中脂肪或蛋白含量降低，奶品质下降，严重影响奶牛生产性能。感染的奶牛乳腺变硬，可诱发乳腺组织纤维化发展，甚至导致乳腺萎缩，增加奶牛的淘汰率，提高生产成本。牛支原体性奶牛乳房炎传染性极强，临床上依靠以杀灭牛支原体为主要目的抗生素治疗方案效果不佳，给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。

牛支原体已经成为制约规模化奶牛养殖业发展的重要因素之一。然而，由于缺乏标准化实验动物模型，给牛支原体相关疾病的防控、新型治疗药物和疫苗研发带来巨大的障碍。目前，针对牛支原体的致病模型主要有犊牛、豚鼠的肺炎模型，为牛支原体呼吸道相关疾病的疫苗研发奠定了良好基础。然而，针对牛支原体引起的奶牛乳房炎，尚缺乏有效的病理损伤评价模型。血乳屏障的结构特殊性使支原体乳房炎的治疗方案不同于牛支原体肺炎模型，给奶牛乳房炎的抗炎治疗方案以及抗生素替代药品研发带来障碍。因此，十分有必要构建一种易于操作和标准化的支原体乳房炎模型，为研发牛支原体奶牛乳房炎新型治疗方案奠定技术基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种牛支原体性小鼠乳腺炎模型的构建方法及其应用。

本发明提供了一种小鼠乳腺炎模型的构建方法，包括如下步骤：将感染液接种至泌乳期小鼠的乳腺；所述感染液是用无菌缓冲溶液悬浮牛支原体NMH7株得到的。

所述缓冲溶液具体可为磷酸盐缓冲溶液。

所述小鼠具体可为CD-1小鼠。

接种量为每个乳腺接种感染液100μl以上。

接种量具体可为每个乳腺接种感染液100μl。

感染液中，牛支原体NMH7株的浓度为1×10⁶CFU/ml以上。

感染液中，牛支原体NMH7株的浓度具体可为1×10⁶CFU/ml。

具体的，接种方式可为通过小鼠乳导管接种。

接种方式也可为其他现有技术中的接种方式。

泌乳期小鼠为分娩4-7天后的小鼠。

泌乳期小鼠具体可为分娩5天后的小鼠。

时间选择在分娩4-6天后，理由是小鼠分娩后，乳腺开始发育，在第4天乳腺腺泡发育成熟，最适于感染模型的制作。注射时间不宜过晚，因为小鼠泌乳期为14天，时间太晚，乳腺会退化，腺泡被脂肪组织代替，无法用于感染模型制作。在本模型中，选在分娩4-6天后，目的在于选择乳腺腺泡最为成熟，功能最佳的状态。

具体的，小鼠的乳腺为小鼠的第四对乳腺。小鼠一共有五对乳腺，其中第四对乳腺最为发达，适用于感染模型的建立。