[发明专利]测定血清样品中β-CTx和或G-17的方法及其组合物

说明书

本发明提供了一种测定血清样品中β‑CTx和/或G‑17的方法，该方法包括，向从受试者获得的含有β‑CTx和/或G‑17的血清样品中加入低分子量肝素和/或丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂。通过添加低分子量肝素或丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂，抑制凝血因子的活性，有利于提高待测样品的稳定性，且向血清中添加的添加剂所引起的基质效应较小，能够确保检测的准确性。而且，二者连用后的协同作用能够进一步提高样品的稳定性，提高检测的准确性。

技术领域

本发明涉及检测试剂领域，具体而言，涉及一种稳定血清中多肽的方法及其组合物。

背景技术

I型胶原羧基端肽是人体在骨吸收过程中由I型胶原羧基端降解后释放到血液循环中的一种短肽，包含其特异性的α-8AA八肽（EKAHDGGR），在骨成熟过程中，α-8AA八肽序列发生β异构化，形成β-8AA八肽（β-CTx, β-cross lap），此类羧基端的同分异构体肽是I型胶原降解的主要特异性产物。

胃泌素-17(gastrin-17, G-17)是由胃窦部 G 细胞分泌的激素类多肽，G-17可以提示患者胃黏膜的功能状态，在胃肠疾病的诊断中具有重要意义。

这两种多肽由于分子量较小，结构简单，其蛋白酶切位点更容易暴露在环境中，更易被蛋白酶酶解，从而导致稳定性差。在其作为血清标志物在临床应用中，血清样本的多肽在常温条件下几个小时内就已经开始降解，明显影响了其临床应用的准确性、重复性以及便利性。

为了提高多肽的稳定性，研发人员做了大量的改进工作。比如通过筛选避开多肽蛋白酶酶切位点的抗体作为捕获抗体和检测抗体来提高多肽待测物在血清或血浆样本中的稳定性，但该方法成本高，技术难度大，限制了其应用。此外，也有研发人员通过在血清或血浆中添加多肽稳定剂来提高多肽待测物的稳定性，但多肽稳定剂在提高多肽待测物的稳定性的同时又引入其它问题，也影响了其应用。

现有技术中使用了二甲基亚砜（DMSO）在哺乳动物生物学样品，诸如血清或血浆样品中稳定温度敏感型肽，即胃泌素和胃泌素相关肽，免于降解的用途。但DMSO添加量4%～6%才能达到理想效果，添加量较多，血清中含量较高，易产生基质效应，此外DMSO作为有机溶剂，也可能会影响抗原抗体的反应，影响血清或血浆标志物检测的准确性。

鉴于现有技术的缺陷，急需一种能够稳定多肽同时又不影响检测准确性的检测方法。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种多肽稳定剂，以解决现有技术中多肽在血清中稳定性差的问题，同时不影响检测准确性。

为了实现上述目的，本发明第一方面提供了一种测定血清样品中β-CTx和/或G-17的方法，该方法包括，向从受试者获得的含有β-CTx和/或G-17的血清样品中加入低分子量肝素和/或丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂。

进一步的，丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂选自PMSF（苯甲基磺酰氟），AEBSF（4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐）；优选的，丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂选自AEBSF。

进一步的，所述丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂的浓度为0.1mM~1mM。

进一步的，低分子量肝素的分子量范围为4000D~6100D。

进一步的，低分子量肝素的浓度0.1IU/mL~1IU/mL。

为了实现上述目的，本发明第二方面提供了一种组合物，包括1）β-CTx和/或G-17，2）丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂和/或低分子肝素。

进一步的，丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂选自PMSF（苯甲基磺酰氟），AEBSF（4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐）；优选的，丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂选自AEBSF。

进一步的，所述丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂的浓度为0.1mM~1mM。