[发明专利]一种模拟田间快速诱导抗球虫药耐药株的方法及其分离鉴定方法

权利要求书

1.一种模拟田间快速诱导抗球虫药耐药株的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)在垫料上散养雏鸡，设置加药组和球虫接种组，所述球虫接种组的雏鸡接种孢子化的艾美耳球虫卵囊，且试验期间不添加任何抗球虫药物的饲料，所述加药组的雏鸡在整个试验期间饲喂的饲料中添加含有工作浓度的抗球虫药物；

(2)在所述球虫接种组的雏鸡接种的艾美耳球虫完成一个生活周期后，收集所述球虫接种组垫料中的新鲜粪便，并抛洒至所述加药组雏鸡的垫料表面以保证所述加药组的雏鸡能够感染艾美耳球虫，此后定期向所述加药组投放所述接种组的垫料上的新鲜粪便；

(3)在试验周期内，每天分别收集所述球虫接种组及加药组雏鸡的新鲜粪便进行卵囊计数，并绘制排卵囊曲线，观察所述加药组雏鸡出现排卵囊的高峰时间；

(4)第一试验周期结束后，另外选取新的雏鸡进行二次试验，其中，第一试验组的雏鸡饲养在原加药组垫料上，第二试验组的雏鸡则饲养在无球虫的新鲜垫料上；两组雏鸡均用含有不低于工作浓度的抗球虫药物拌料饲喂，并定期采集第一试验组垫料中的新鲜粪便，抛洒在第二试验组的垫料表面，进行感染；

(5)分别定期采集所述第一试验组和第二试验组雏鸡盲肠，以每只雏鸡的盲肠内容物作为一个耐药株样品，观察盲肠病变情况，并单独收集每只雏鸡的盲肠卵囊，计数并进行孢子化处理；

(6)利用高剂量抗球虫药物进行拌料喂饲无球虫雏鸡，并对雏鸡经口接种之前收集盲肠内容物后孢子化卵囊，收取接种后6-10天粪便中的卵囊，即得所需耐药株。

2.根据权利要求1所述模拟田间快速诱导抗球虫药耐药株的方法，其特征在于，所述步骤(2)和步骤(3)中，收集所述新鲜粪便的步骤采用“五点取样法”进行。

3.根据权利要求1或2所述模拟田间快速诱导抗球虫药耐药株的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，向所述加药组投放所述球虫接种组的垫料中产生的新鲜粪便的步骤中，定期投放的周期为选定球虫株的排卵囊高峰期。

4.根据权利要求1-3任一项所述模拟田间快速诱导抗球虫药耐药株的方法，其特征在于，所述步骤(4)和(5)中，所述定期采集步骤的间隔周期为选定球虫株的排卵囊高峰期。

5.根据权利要求1-4任一项所述模拟田间快速诱导抗球虫药耐药株的方法，其特征在于，所述步骤(6)中，所述高剂量抗球虫药物的浓度为其工作浓度的3-4倍剂量，并不超过选定药物的中毒剂量。