[发明专利]一种基于油水界面自组装的三明治SERS免疫传感器检测宫颈癌患者血清生物标志物方法

权利要求书

1.一种基于油水界面自组装的三明治SERS免疫传感器检测宫颈癌患者血清生物标志物方法，其特征是，4-ATP与DTNB均通过Au-S键修饰在Au/AgAHNSs的表面，偶联抗体后形成两种SERS探针；其次，制备含有DMSA和不同浓度SCCA和survivin抗体分子的SERS疫基底；当探针上的SCCA和survivin抗原分子和基底上的抗体进行特异性结舍，便检测到4-ATP和DTNB的信号，并且强度的大小是受SCCA和survivin浓度的影响；根据4-ATP和DTNB特征峰的强度即可同时对宫颈癌患者血清中SCCA和survivin进行定量检测。

2.根据权利要求1所述的一种基于油水界面自组装的三明治SERS免疫传感器检测宫颈癌患者血清生物标志物方法，其特征是，具体包括以下步骤：

1)血清标本的采集与处理；

2)Au/AgAHNSs的合成；

3)Au/AgANBs的合成；

4)Au/AgAHNSs SERS探针的制备；

5)Au/AgANBAs基底的制备；

6)SCCA和survivin免疫反应测定的过程。

3.根据权利要求2所述的一种基于油水界面自组装的三明治SERS免疫传感器检测宫颈癌患者血清生物标志物方法，其特征是，所述步骤1)血清标本的采集与处理：将标本用1000rpm离心10min后，小心并彻底吸取上清液，保存于-80℃冰箱待测。

4.根据权利要求3所述的一种基于油水界面自组装的三明治SERS免疫传感器检测宫颈癌患者血清生物标志物方法，其特征是，所述步骤2)Au/AgAHNSs的合成：

通过种子介导的生长途径合成了Au/Ag AHNSs；

将2mL AgNO₃溶液和0.025g K₂CO₃置于烧瓶中以获得0.5mM的银种子溶液；

接着在剧烈搅拌下，将2mL制备好的THPC快速添加到银种子溶液中；彻底搅拌至少10min后，将0.5mL AA快速注入上述溶液中，溶液颜色从黄色变为蓝色；随后将获得的Au/AgAHNSs离心并重新分散到超纯水中，以去除生长过程中未反应的化学试剂；

将0.01g HAuCl₄溶解于100mL水和5mL PVP溶液的混合物中制备0.5mM的HAuCl4溶液；将5mL上述溶液快速滴入银纳米壳溶液中，轻轻搅拌并继续反应2h，然后冷却至室温；通过离心收集产物，并用等量超纯水重新分散。

5.根据权利要求4所述的一种基于油水界面自组装的三明治SERS免疫传感器检测宫颈癌患者血清生物标志物方法，其特征是，所述步骤3)Au/AgANBs的合成：

在空心金纳米笼的制备过程中，首先将90mLHAuCl₄溶液加入20mL超纯水中；在750rpm搅拌5min后，接着加入340mL AgNO₃，形成乳白色溶液；在强烈搅拌下5min后，向反应溶液中加入80mL AA；搅拌至溶液变成蓝色表明反应完全，合成了空心金纳米笼。

6.根据权利要求5所述的一种基于油水界面自组装的三明治SERS免疫传感器检测宫颈癌患者血清生物标志物方法，其特征是，所述步骤4)Au/AgAHNSs SERS探针的制备：

首先，取制备好的Au/AgAHNSs 10mL，往里面加入50mL的4-ATP己醇溶液或50mL的DTNB己醇溶液，揽拌反应2h，10000rpm离心10min，去上清后将沉淀的Au/AgAHNSs再次分散在去离子水中；

然后，将20mL NHS/EDC PBS溶液滴入上述溶液中，在37℃的摇床中培养30min；接着分别加入5mL SCCA抗体溶液和5mL survivin抗体溶液，混合后在37℃反应2h；

最后，加入1mL的1％的BSA溶液进行封闭反应，其中BSA是溶于PBS缓沖液中的；在10000rpm离心10min后，去上清加入10mL的PBS缓冲液中，储存备用。