[发明专利]一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种DNA提取试剂，其特征在于，所述DNA提取试剂包括裂解液、磁珠以及磁珠结合液；

其中，所述磁珠结合液中，硫氰酸胍质量浓度为1-10M/L、Tris质量浓度为10-100mM/L、EDTA的质量浓度为10-100mM/L、Triton X-100的体积分数为2％；

或所述结合液中，硫氰酸胍的质量浓度为1-10M/L、Tris的质量浓度为10-100mM/L、EDTA的质量浓度为10-100mM/L、吐温20的体积分数为1.5％；

所述磁珠采用硅羟基磁珠。

2.如权利要求1所述的DNA提取试剂，其特征在于，

所述DNA提取试剂包括漂洗液和洗脱液；

所述漂洗液包括第一漂洗液和第二漂洗液；

所述第一漂洗液中，PEG 6000 5-10％(w/v)、NaCl 20-50mmol/L，溶剂为无菌水；

所述第二漂洗液为75-80％的乙醇；

所述洗脱液为pH为8.0，1M/L Tris或RNase-free水。

3.如权利要求1所述的DNA提取试剂，其特征在于，

所述裂解液中，异硫氰酸胍的摩尔浓度为0.5-5mol/L、SDS的浓度为0.1-5％、Tris-HCl缓冲液的浓度为10-80mmol/L、EDTA的浓度为0.5-10mmol/L、NaCl的浓度为5-50mmol/L、Triton X-100的体积分数为0.1-2.0％、吐温20的体积分数为0.1-2.0％。

4.如权利要求1-3中任一项所述的DNA提取试剂，其特征在于，

所述磁珠的粒径为200-600nm。

5.一种DNA提取试剂盒，其特征在于，所述DNA提取试剂盒包括权利要求1-3中任一所述的DNA提取试剂。

6.如权利要求5所述的DNA提取试剂盒，其特征在于，所述的DNA提取试剂盒还包括离心管、与磁力架配合使用。

7.一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法，其特征在于，使用权利要求1-4中任一所述的DNA提取试剂和权利要求5或6所述的DNA提取试剂盒，包括：

1)将干血斑样品加入裂解液和蛋白酶K，预热振荡裂解，得到裂解混合液；

2)将上述裂解混合液加入混匀的硅羟基磁珠和磁珠结合液混和液中，振荡混匀；

3)将步骤2)中的混合液置于磁力架上静置，去除液体；

4)将步骤3)中的磁珠用漂洗液洗涤2次；

5)将清洗后的磁珠晾干，用洗脱液洗脱，得到纯化的基因组DNA。

8.如权利要求7所述的磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法，其特征在于，

所述步骤1)中，所述干血斑样品的数量为3-10片，所述裂解液的加入量为200-400μL，蛋白酶K的加入量为20-50μL，预热温度为60-70℃，振荡时间为25-40min；

所述步骤2)中，振荡时间为10min，900rpm。

9.如权利要求7所述的磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法，其特征在于，

所述预热温度为65℃。

10.如权利要求7所述的磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法，其特征在于，

所述干血斑样品的片数为3-10片，所述干血斑样品的大小为2-5mm。