[发明专利]一种磁珠法病毒核酸提取试剂盒

说明书

本发明公开了一种磁珠法病毒核酸提取试剂盒，包含裂解液、磁珠、清洗液I、清洗液II、洗脱液。所述裂解液含有三氯化铝六水合物、非离子表面活性剂、缓冲液、柠檬酸钠、结合剂、巯基乙醇；所述的磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；所述清洗液I为盐酸胍、非离子表面活性剂、PVP、EDTA、硫代硫酸钾、异丙醇；所述清洗液II为70％乙醇；所述洗脱液包含缓冲液、EDTA。与常规的病毒核酸提取方法相比，本发明不需单独加入结合液，实现裂解和结合的同时进行，操作步骤简单，有效缩短提取时间，提高了病毒提取效率。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种磁珠法病毒核酸提取试剂盒。

背景技术

在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基本且最重要的环节，核酸提取的产量、纯度及完整性直接关系到下游核酸检测、生物学研究或其他新产品开发的成败。磁珠法核酸提取方法是指以超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠(以下简称磁珠)为载体，通过磁珠在高盐溶液中吸附核酸，经过磁性分离和漂洗杂质后，在低盐溶液中核酸从磁珠表面解吸附的原理进行核酸提取的方法。该方法不需离心，操作简单，便于高通量、自动化操作，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术。

目前市面上磁珠法的核酸提取试剂盒一般使用胍盐进行裂解，胍盐能溶解蛋白质，导致细胞破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离。但胍盐在实际裂解过程中所需裂解时间较长，且裂解液与结合液在不同时间加入，同时需配合蛋白酶K进行裂解，导致普遍具有核酸提取时间过长，提取效率较低的弊端。

发明内容

本发明提供一种能够有效缩短时间并提高病毒提取效率的磁珠法病毒核酸提取试剂盒。该试剂盒包括裂解液、磁珠、清洗液I、清洗液II、洗脱液，其中：

所述裂解液的成分和含量如下：

所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；

所述清洗液I的成分和含量如下：

所述清洗液II为70％乙醇；

所述洗脱液的成分和含量如下：

缓冲液 0.02-0.03mol/L

EDTA 0.002-0.03mol/L。

进一步的，所述非离子表面活性剂为NP-40、Tween-20、Triton-X100中的一种或多种。

进一步的，所述缓冲液为PH7.0-8.0Tris-HCl、磷酸缓冲液中的一种。

进一步的，所述结合剂为异丙醇。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1.可以快速、简单、通用的从血液、动物组织、环境样本、唾液、鼻液、拭子中分离纯化病毒的核酸，整个提取过程仅需裂解、清洗1、清洗2、洗脱4个步骤，缩短了提取时间，克服了现有方法步骤繁多的缺点。

2.裂解液中包含结合剂，磁珠预封装进入裂解液中，裂解与结合步骤一步完成，在同一个孔位中三氯化铝六水合物在裂解病毒蛋白结构的同时，结合剂异丙醇沉淀核酸，核酸可更快的吸附在磁珠上。

3.本试剂盒裂解液中的三氯化铝六水合物具有超强的裂解能力，不需配合蛋白酶K进行裂解，省去了蛋白酶K需要低温运输的麻烦，操作更为简单。

4.自动化应用时每一步骤的反应试剂可以预先灌装入对应的反应仓内，使用时只需将样本加入指定反应仓，即可放入仪器中开始提取操作。更适用于全自动核酸提取应用。