[发明专利]一种急性髓细胞性白血病的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种急性髓细胞性白血病的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。该标志物包括序列为SEQ ID NO.1～100所示的蛋白中的至少一种。本发明基于高通量测序方法，只需要采取少量外周血，提取RNA，通过对样本的处理建立免疫图谱文库，再经过高通量测序和TCR数据分析，首先确定急性髓细胞性白血病外周血中特征性TCR序列，然后将待测样本测试结果与该特征性TCR序列比对，从而确定是否患有急性髓细胞性白血病。本发明能够同时比较巨大数量的急性髓细胞性白血病特异性TCR序列，相比单独检测一种或几种标记物，具有更高的特异性和准确性，提高了诊断效率。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种急性髓细胞性白血病的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。

背景技术

急性髓细胞性白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是髓系造血干/祖细胞恶性疾病。以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征，临床表现为贫血、出血(血小板减少)、感染和发热、脏器浸润、皮肤浸润、代谢异常、牙龈增生等，多数病例病情急重，病情进展迅速，自然病程仅有数周至数月，预后凶险，如不及时治疗常可危及生命。本病占小儿白血病的30％。在分子生物学改变及化疗反应方面儿童急性髓细胞性白血病与成人(50岁)相似。婴幼儿的急性髓细胞性白血病比成人易发生髓外白血病。我国急性白血病比慢性白血病多见，其中急性髓细胞性白血病最多(1.62/10万)。

目前针对急性髓细胞性白血病的诊断手段主要有血常规检测、细胞化学检查、免疫分型、染色体检测、骨髓象检测。

在血常规检测中贫血和血小板减少极其常见(占75％～95％)，半数急性髓细胞性白血病患者白细胞数增高，多在10×10⁹/L～100×10⁹/L之间，部分病例甚至100×10⁹/L。部分患者白细胞数可正常，少数患者(常为M3型或老年病例)白细胞数4.0×10⁹/L。部分患者血红蛋白低于正常值，甚至出现严重贫血，网织红细胞常减少。血小板数多数患者减少，少数正常或轻度增高。该种检测根据患者情况不同结果可高可低且不能作为定性急性髓细胞性白血病的检测。

急性髓细胞性白血病的不同亚型其细胞化学染色特点不尽相同，因此急性髓细胞性白血病的细胞化学染色对该病的诊断十分重要。常用的细胞化学染色方法包括髓过氧化物酶染色(MPO)、苏丹黑B染色(SBB)、氯醋酸AS-D萘酚酯酶染色(NAS-DCE)、α-丁酸萘酚酯酶染色(α-NBE)、α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)、过碘酸-雪夫染色(糖原染色、PAS)、酸陛磷酸酶染色(ACP)、碱性磷酸酶染色(NAP)、溶菌酶等方法。必要时可做酯酶双染色和Phl(φ)小体等。该种检测不能用于急性髓细胞性白血病的早期诊断。

免疫分型是根据急性髓细胞性白血病细胞表达的相关抗原确定其系列来源，常用多参数流式细胞仪进行分析，进一步将急性髓细胞性白血病分为不同亚型。该检测因受到相关抗原量的影响灵敏度不高。

80％～90％的儿童急性髓细胞性白血病伴有染色体异常。其中约半数急性髓细胞性白血病病例只以单独核型异常出现，其余伴有附加异常。采用高分辨技术，核型异常发现率高达90％以上。急性髓细胞性白血病的染色体异常以结构畸变为主，高达39种之多，某些特殊的结构异常，如t(8；21)(q22；q22)、t(15；17)(q22；q21)和inv(16)(p13；q22)或t(16；16)(p13；q11)，与良好预后相关。该种检测唯一性不足，不能用于早期诊断。

骨髓象检测多数患者高度增生，正常造血细胞被白血病细胞取代；少数患者骨髓增生低下，但原始细胞仍在30％以上。如胞浆内发现Auer小体，更有助于排除急性淋巴细胞性白血病(ALL)而确诊为急性髓细胞性白血病该种检测根据患者情况不同结果可高可低且不能作为定性急性髓细胞性白血病的检测。

除以上检测之外，目前可用于诊断急性髓细胞性白血病的标志物非常少。

发明内容