[发明专利]一种叶酸对映异构体含量的检测方法

说明书

本发明提供了一种叶酸对映异构体含量的检测方法，检测条件为：色谱柱采用阴离子交换手性色谱柱；流动相由组分A、B、C组成；所述组分A包括甲醇和/或乙腈；所述组分B选自冰醋酸、丙酸、苯甲酸、苯乙酸或三氟乙酸；所述组分C包括三乙胺和/或二乙胺。本发明提供的检测方法适用于检测叶酸、含有叶酸的制剂及含有叶酸的复方制剂、含有叶酸的多种维生素制剂中叶酸对映异构体的含量，操作简便，方法专属性、溶液稳定性、线性关系良好，方法灵敏度(检测限)符合要求。

技术领域

本发明涉及化学分析技术领域，尤其涉及一种叶酸对映异构体含量的检测方法。

背景技术

叶酸也叫维生素B9，是一种水溶性维生素。叶酸是机体细胞生长和繁殖所必需的物质，在体内以四氢叶酸的形式发挥作用，四氢叶酸在体内参与嘌呤核酸和嘧啶核苷酸的合成和转化。叶酸能够预防脑卒中。高同型半胱氨酸血症是脑卒中的高危因素之一，而同型半胱氨酸增高与人体的叶酸缺乏有密切的关联，因此，补充叶酸能够有效的降低同型半胱氨酸，减少H型高血压的发生以及减轻动脉硬化的程度，从而有效的预防脑卒中。叶酸还用于妊娠期、哺乳期妇女预防给药。用于预防胎儿神经管畸形、各种原因引起的叶酸缺乏及叶酸缺乏所致的巨幼红细胞贫血。

叶酸化学结构含一个手性碳原子，现在叶酸及叶酸相关制剂使用的叶酸均为S构型，叶酸为单一对映体药物，而对映异构体R构型即为杂质。参考ICH Q6A文件要求，对于被开发为单一对映体的手性原料药，需要和控制其他杂质一样对于另一对映体进行控制。

中国药典2015年版二部、EP10.0、BP2020、叶酸的质量标准有关物质检查均采用高效液相色谱法，使用常规反相液相色谱柱，常规反相液相色谱法用的流动相，无法分离叶酸与叶酸对映异构体。

互为对映异构体的化合物，在物理性质方面旋光方向相反，但强度相同。化学性质方面，除了在手性试剂中表现出的化学选择性方面的不同以外，其他的化学性质均相同。现有的文献和专利中叶酸的含量检测方法、有关物质检测方法中，均使用常规的反相液相色谱柱，叶酸对映异构体与叶酸峰重合，无法分离，进而无法分离叶酸与叶酸对映异构体，均无法检测叶酸对映异构体的含量。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种叶酸对映异构体含量的检测方法，可以准确、灵敏的检测叶酸、含有叶酸的制剂及含有叶酸的复方制剂、含有叶酸的多种维生素制剂中叶酸对映异构体的含量。

为达到上述目的，本发明提供了一种叶酸对映异构体含量的检测方法，检测条件为：

色谱柱采用阴离子交换手性色谱柱；

流动相由组分A、B、C组成；

所述组分A包括甲醇和/或乙腈；

所述组分B选自冰醋酸、丙酸、苯甲酸、苯乙酸或三氟乙酸；

所述组分C包括三乙胺和/或二乙胺。

本发明优选的，所述色谱柱可以采用大赛璐CHIRALPAKQN-AX离子交换柱或其他性能相当的阴离子交换手性色谱柱。

本发明选用的流动相由组分A、B、C组成；

其中，所述组分A包括甲醇和/或乙腈；更优选为甲醇。

所述甲醇和乙腈的体积比优选为(100～50)：(0～50)。

所述组分B选自冰醋酸、丙酸、苯甲酸、苯乙酸或三氟乙酸；更优选为冰醋酸。

所述组分C包括三乙胺和/或二乙胺，更优选为三乙胺。

所述三乙胺和二乙胺的体积比优选为(100～0)：(0～100)。

本发明优选的，所述组分A、B、C的体积比为(100～98)：(1.2～0.8)：(1.2～0.8)；更优选为100:1:1。