[发明专利]一种碳量子点荧光淬灭免疫层析试纸条的制备及应用

说明书

本发明公开了一种碳量子点荧光淬灭免疫层析试纸条的制备及应用，包括以下步骤：(1)以柠檬酸和硫脲为碳量子点合成原料通过微波反应制备绿色荧光碳量子点；(2)将碳量子点通过活化酯法与鸡卵白蛋白偶联制备荧光供体探针；(3)将待测物抗体与金纳米粒子以物理吸附的方式偶联制备荧光受体探针；(4)按顺序依次将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫粘贴于PVC背板上；(5)所述的硝酸纤维素膜上分别包被有荧光供体探针‑待测物抗原混合物构成的检测线和荧光供体探针构成的质控线；(6)将荧光受体探针与待测样品混合后滴加于样品垫，通过毛细管作用向吸水垫层析，待测物抗原与待测物竞争结合荧光受体探针；(7)通过365nm紫外灯照射观察检测线处荧光强度。本发明具有特异性高、灵敏度好、操作简便及可实现定量检测的优点。

技术领域

本发明涉及一种碳量子点荧光淬灭免疫层析快速检测技术，特别是一种以绿色碳量子点为荧光供体探针的小分子待测物的荧光淬灭免疫层析试纸条，属于免疫层析检测技术领域。

背景技术

基于抗原抗体特异性结合反应的免疫分析技术因其独特的识别形式以及其特异性、可逆性及反应阶段性等优异的特点得到了广泛的关注及研究，并逐渐成为临床疾病诊断的重要检测手段。免疫诊断技术也与生化诊断和分子诊断技术构成了体外诊断的三大领域。在世界粮农组织(FAO)的推荐下，免疫分析方法也被逐渐应用于食品安全检测分析领域，并已成为了食品安全检测的重要组成部分。包括ELISA，化学发光酶免疫分析，荧光免疫分析，免疫层析传感分析(ICS)在内的各种免疫测定已被广泛用于现场快速检测农产品和动物产品中的食品污染物残留[1-3]。

在众多免疫分析技术手段中，结合了多种标记手段的免疫层析分析方法因具有操作简单、检测时间短、便携以及可视化等多种优点，已逐渐被开发并作为快速筛选工具被广泛应用于食品安全领域[4]。而随着纳米技术的发展，免疫层析分析方法由传统胶体金标记手段实现比色分析而逐渐向由其他多种形式的比色、荧光及荧光淬灭等标记手段实现对待测物的快速及高灵敏检测[5,6]。其中，比色分析的优点在于无需任何信号捕捉技术即可通过肉眼实现对待测物的定性半定量检测分析，在现场快速筛查过程中具有一定优势，目前比色分析的主要标记材料多为金属纳米粒子、染色微球等[2]。但因肉眼分辨比色信号能力较差以及背景干扰大等原因，其灵敏度已无法满足痕量污染物的检测需求。荧光分析的优点在于基于荧光信号的输出在具有高灵敏度的同时可以避免基质干扰。以上两种分析方法在应用于食品中小分子待测物检测时，均以颜色或荧光信号消失 (turn-off)作为检测限(LOD)或检测临界值(cut-off值)，且信号强度随待测物含量的增加而降低，本实验将该信号输出模式称为“turn-off”模式。相较于以上两种分析方法，基于荧光共振能量转移(FRET)的荧光淬灭分析方法在食品中小分子待测物检测时以荧光信号的出现(turn-on)作为LOD或cut-off值，其信号强度随待测物含量的增加而逐渐增加，因此而具有更高的检测灵敏度[9]。但在构建荧光淬灭体系的过程中，荧光供体和荧光受体探针的匹配成为了其关键限制因素。目前荧光分析的主要标记材料多为荧光微球(FM)，量子点(QD)和上转换纳米粒子(UCNP)[7,8]等。但是，半导体量子点和稀土UCNP具有原料稀少，价格昂贵，合成工艺复杂，生物毒性较大等缺点。与这些材料相比，碳量子点(CDs)不仅具有毒性低，生物相容性好的优点，而且具有光稳定性好，功能简单，成本低廉和大量合成的优势。目前，微波法合成绿色碳量子点为荧光供体探针、金纳米颗粒为荧光受体探针的小分子待测物光热荧光淬灭免疫层析分析技术还未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种碳量子点荧光淬灭免疫层析快速检测试纸条，为了实现上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：