[发明专利]唐古特虎耳草中一种新的杜鹃素糖苷类自由基抑制剂及其分离制备工艺和应用

权利要求书

1.唐古特虎耳草中一种新的杜鹃素糖苷类自由基抑制剂，其特征在于，该杜鹃素糖苷类自由基抑制剂呈白色粉末状，其名称为杜鹃素糖苷类-(-)-rhododendrin-4'-β-D-glucoside自由基抑制剂，其分子式为C₂₂H₃₄O₁₂，其化学结构式为：

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2.根据权利要求1所述的唐古特虎耳草中一种新的杜鹃素糖苷类自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤1，提取：将唐古特虎耳草全草阴干，粗碎后按料液比1g：5~100mL的甲醇提取，在室温下提取2~4次，每次2~4 h，过滤、合并滤液，即滤液A，该滤液A按聚酰胺的量：唐古特虎耳草药材的量=1:5拌样并减压干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌样样品；

步骤2，微孔树脂柱粗分：唐古特虎耳草提取物拌样样品，该样品经装有微孔树脂的中压色谱分离，经检测波长为254 nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第三个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得目标组分Fr3，其中，所述微孔树脂柱的粗分离工作参数为：色谱柱柱长460 mm、直径49 mm，微孔树脂柱固定相为CHP20P，流动相A为水，B为乙醇，色谱条件为0~120min，0~100%B，120~150min，100%B，进样量为40g，流速为30 mL/min；

步骤3，在线自由基抑制剂组分筛选：在所述唐古特虎耳草目标组分Fr3中加入体积浓度为15~30%的甲醇进行溶解，配制样品浓度为70.0~100.0 mg/mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤，得到唐古特虎耳草目标组分Fr3样品溶液，即滤液B，取1mL滤液B，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统，筛选唐古特虎耳草目标组分Fr3中自由基抑制剂；其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用耐纯水C18反相色谱柱250×4.6mm，5μm，检测波长为254nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPPH溶液，检测波长为517nm；

步骤4，反相中压色谱柱分离：唐古特虎耳草目标组分Fr3样品溶液经装有反相填料的中压色谱塔分离，经检测波长为254 nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第三个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得目标组分Fr3-3；其中，所述反相中压色谱柱分离的工作参数为：色谱柱柱长500mm、直径50mm，反相中压色谱柱固定相为50μm的SphericalC18，流动相A为水，B为甲醇，色谱条件为0~120min，10~75%B，进样量为10mL，流速为70mL/min；

步骤5，在线自由基抑制剂筛选：在唐古特虎耳草目标组分Fr3-3中加入体积浓度为15~30%的甲醇进行溶解，配制样品浓度为40.0~60.0 mg/mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤，得到唐古特虎耳草目标组分Fr3-3的溶液，即滤液C，取1mL滤液C，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统筛选唐古特虎耳草目标组分Fr3-3中自由基抑制剂；其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用亲水色谱柱XION 250×4.6mm，5μm，检测波长为254nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPPH溶液，检测波长为517nm；

步骤6，亲水高压制备柱制备：所述滤液C经亲水制备柱分离，经检测波长为254 nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中对应的色谱峰馏分Fr3-3-1，色谱峰馏分Fr3-3-1经减压干燥即得纯度大于95%的新的杜鹃素糖苷类-(-)-rhododendrin-4'-β-D-glucoside自由基抑制剂；其中，亲水高压制备柱制备的工作参数为：制备柱柱长250 mm、直径20 mm，亲水色谱柱固定相为5μm XION填料，流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，按照0~60min，100~75%B洗脱，进样体积为4 mL，流速为19 mL/min。

3.根据权利要求2所述的唐古特虎耳草中一种新的杜鹃素糖苷类自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，所述步骤3中，第一台高效液相色谱仪采用的流动相A为0.2%甲酸-水溶液，流动相B为乙腈溶液，按照0~60min，5~28%B，流动相流速为1.0mL/min；第二台高效液相色谱仪所使用的DPPH溶液浓度为50μg/mL，流动相流速为0.5mL/min；反应环长度为15m。