[发明专利]一种利用分光光度法测定单宁提取物络合蛋白质能力的方法

说明书

一种利用分光光度法测定单宁提取物络合蛋白质能力的方法，步骤为：将单宁提取物用甲醇溶液配制成质量百分比浓度分别为0.2、0.4、0.8、1.2、1.6mg/mL的系列浓度的单宁溶液；用pH4.9磷酸盐缓冲液配制质量百分比浓度为1mg/mL的牛血清白蛋白溶液；向1mL比色皿中分别加入900μLBSA溶液和100μL不同浓度的单宁溶液，充分混合后，室温静置1min后，在510nm波长下测定反应溶液的吸光度值，以反应缓冲液为空白。以反应溶液中单宁浓度为横坐标，吸光度值作为纵坐标得到线性模拟方程，由线性方程的斜率大小判断单宁络合蛋白质能力大小，斜率越大，单宁络合蛋白质能力越强。

技术领域

本发明涉及一种利用分光光度法测定单宁提取物络合蛋白质能力的方法，属于化学分析技术领域。

背景技术

植物单宁(Vegetable tannin)又名植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物，在维管植物中的含量仅次于纤维素、半纤维素和木质素，广泛存在于植物的皮、根、叶、果中，含量可达20％，是森林资源综合利用的主要对象之一。单宁主要用于鞣皮，制革业上称为植物鞣剂。此外还用作选矿抑制剂、锅炉水处理剂、钻井泥浆稀释剂和金属表面防蚀剂，凝缩类栲胶也作为木工胶黏剂。植物单宁加工业是我国林产化工传统产业的重要组成部分。

络合蛋白质是植物单宁(多酚)最重要的化学特性。植物单宁能够与蛋白质发生反应形成单宁-蛋白质络合物从而降低蛋白质与多酚化合物的生物利用度。植物单宁与蛋白质之间可以通过氢键、疏水键、Pi-Pi堆积作用或静电相互连接，形成络合物。单宁络合蛋白质在动物生理学、营养学和植物生态学及单宁的工业化利用上具有重要的意义。动物生产上经常利用单宁的收敛性，使得单宁提取物可作为饲料添加剂预防和治疗仔猪腹泻。单宁络合蛋白质能力与其化学结构、聚合度(分子量)及蛋白质种类有关。由于不同植物来源的植物单宁提取物在单宁化学组成、聚合度、分子量上存在较大差异，导致其络合蛋白质的能力也差异很大。在实际生产上经常需要测定不同植物来源的单宁提取物对蛋白质络合能力大小，以考察其收敛性及在饲料添加剂上的应用效果。但目前，尚缺乏对单宁络合蛋白质能力的快速测定方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用分光光度法测定单宁提取物络合蛋白质能力的方法。

本发明的技术方案为：一种利用分光光度法测定单宁提取物络合蛋白质能力的方法具体通过以下步骤制备得到：

(1)将单宁提取物用甲醇溶液配制成质量百分比浓度分别为0.2、0.4、0.8、1.2、1.6mg/mL的系列浓度的单宁溶液；

(2)用磷酸盐缓冲液配制质量百分比浓度为1mg/mL的牛血清白蛋白(BSA)溶液；

(3)向1mL比色皿中分别加入900μL BSA溶液和100μL系列浓度的单宁溶液，充分混合后，室温静置1min后，在510nm波长下测定反应溶液的吸光度值，以反应缓冲液为空白；

(4)以反应溶液中单宁浓度(mg/mL)为横坐标，吸光度值作为纵坐标得到线性模拟方程，由线性方程的斜率大小判断单宁络合蛋白质能力大小，斜率越大，单宁络合蛋白质能力越强。

步骤(1)中所述单宁提取物可来自于五倍子、塔拉、橡椀、高粱单宁、化香果、栎木、板栗苞、毛杨梅树皮、马占相思树皮、落叶松树皮、余甘树皮、黑荆树树皮、桉树皮、红树植物、油茶果壳及各种植物的果实、果壳、树皮等部位提取的单宁提取物。

步骤(2)中所述的磷酸盐缓冲液pH值为4-5.5，最终优化为pH4.9。

本发明的有益效果：本发明技术操作简单、便捷、对仪器设备要求低、稳定性好，可用于不同植物来源的单宁提取物络合蛋白质能力的测定。

附图说明

图1五倍子单宁酸提取物络合BSA滴定反应曲线。

图2高粱单宁提取物络合BSA滴定反应曲线。