[发明专利]一种抗PD-1抗体的纯化方法

说明书

本公开涉及一种抗PD‑1抗体的纯化方法。具体而言，该纯化方法包括使用亲和层析、病毒灭活、阴离子膜层析和阳离子交换层析等方法来去除污染物。该工艺可降低生产成本并提高抗体收率。

技术领域

本公开属于生物工程领域，具体涉及一种抗PD-1抗体的纯化工艺，包括使用亲和层析、病毒灭活、阴离子膜层析和阳离子交换层析等方法来去除污染物。

技术背景

抗体类药物是目前最有前景的生物技术药物，具有靶向性好、特异性强、毒副作用小等优点，主要用于恶性肿瘤和自身免疫性等疾病治疗。全球单抗的市场规模持续增大，已成为各国生物制药的竞争焦点。

近年来，国内制药企业也纷纷加速布局抗体类药物。抗体类药物作为生物大分子，研发的技术难度大，研发周期长。但抗体类药物市场需求和激烈竞争迫使各企业必须加快抗体药物的研发速度和缩短研发周期。加快细胞株筛选和细胞培养工艺的优化，成为其中非常重要的环节。细胞株筛选和细胞培养工艺的优化，需要纯化出足量的高纯度样品用于产品质量的分析检测，从而评估细胞株和细胞培养工艺是否能满足要求。

现有技术中，对于抗体类药物纯化的工艺包含多个步骤，常用的有亲和层析、离子交换层析、疏水层析、超滤等。由于抗体类药物分子的理化性质比较相似，因此，许多公司会建立自己的抗体纯化工艺平台，将多种纯化步骤串联起来使用，以求工艺稳定，产率较高。如(Abhinav A.Shukla，Brian Hubbard，Tim Tressel，Tim Tressel，Sam Guhan，DuncanLow.Downstream processing of monoclonal antibodies-Application of platformapproaches[J].Journal of Chromatography B，2007，848:28-39.)公开了一种纯化工艺，发酵液经过澄清步骤去除细胞等杂质以获得上清液，然后利用亲和层析捕获上清液中的目标蛋白，通过精纯去除蛋白中的各类杂质，然后进行病毒灭活，将病毒滴度降低，最后的超滤将蛋白置换使其形成稳定的制剂缓冲液。

抗PD-1抗体是当前备受瞩目的一类抗体，全球有多家跨国药企正在开发，施贵宝制药公司的nivolumab和默沙东公司的pembrolizumab已于2014年上市，上市后销售额均突破十亿美元。WO2017054646A公开了一种抗PD-1抗体的序列，该抗PD-1抗体安全性良好，已报到的临床研究结果已经显示出其具有一定的抗肿瘤作用([J].Journal of ClinicalOncology 35(2017):e15572-e15572)。

由于抗体分子量大、结构复杂，不同抗体之间的差异性也较大，不同抗体与离子交换剂的结合力不仅与其携带的电荷的数目有关，还与抗体分子量的大小及电荷排列等也有一定关系。因此，针对不同的抗体，优化出合适的离子层析纯化工艺，尽可能降低生产成本并提高抗体收率，是目前需要迫切解决的技术问题。

发明内容

本公开提供了一种利用阳离子层析纯化包含抗体和污染物的组合物的方法，包括以下步骤：

1)上样：将所述组合物加载到阳离子交换材料上；

2)清洗：用平衡缓冲液清洗阳离子交换材料；

3)洗脱：用洗脱缓冲液从阳离子交换材料上洗脱下目的抗体；

4)稀释：收集洗脱液，稀释。

一些实施方案中，在所述阳离子交换层析前还包括以下步骤：a)亲和层析；b)病毒灭活；c)阴离子膜层析。

一些实施方案中，所述亲和层析所使用的填料选自UniMab 50、UniMab HC、UniMabPro、MabSelect SuRe、MabSelect SuRe LX、MabSelect PrismA、Amsphere、ProSep UltraPlus(PUP)。在一些具体的实施方案中，所述亲和层析所使用的填料为MabSelect PrismA。