[发明专利]一种检测全血中免疫抑制剂药物的方法在审

专利信息
申请号: 202110240210.8 申请日: 2021-03-04
公开(公告)号: CN113049726A 公开(公告)日: 2021-06-29
发明(设计)人: 冯振;景叶松;弭兆元 申请(专利权)人: 山东英盛生物技术有限公司
主分类号: G01N30/88 分类号: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
代理公司: 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 代理人: 孙维傲
地址: 250101 山东省济南市高新区大正路1*** 国省代码: 山东;37
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摘要:
搜索关键词: 一种 检测 全血中 免疫抑制剂 药物 方法
【说明书】:

发明提供一种检测全血中免疫抑制剂药物的方法,所述免疫抑制药物为依维莫司和西罗莫司,其特征在于,所述方法包括对全血样品进行提取后采用HPLC‑MS法检测分析,其中,提取液为三氟醋酸和氟化铵的甲酸溶液。本发明的方法解决了现有或常规方法采用有机溶剂蛋白沉淀提取药物在上机检测过程中对人员和环境产生危害、储存和回收成本高,以及提取药物信号和灵敏度低的问题,尤其对免疫抑制剂药物中的依维莫司和西罗莫司信号低达不到检测要求的问题,并且本发明的方法线性良好可行性高。

技术领域

本发明涉及血药监测技术领域,具体涉及一种检测全血中免疫抑制剂药物的方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解,而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

依维莫司和西罗莫司属于免疫抑制剂类药物,主要用于抗器官移植排斥反应,还可应用于治疗某些自身免疫性疾病,临床应用较广。由于免疫抑制剂类药物在人体中生物利用度个体差异大,血药浓度与疗效及毒性密切相关,且血药浓度易被多方面因素影响。因此,定时对患者体内依维莫司和西罗莫司的血药浓度监测,制定个体化给药方案,对提高器官移植的存活率,促进免疫抑制剂类药物在临床的合理应用具有重要的临床意义。

目前临床或实验室诊断方法有荧光偏振免疫法、化学发光微粒子免疫检测法、高效液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱-紫外检测法、均相酶免疫法等,其中HPLC-MS方法越来越受到关注。样本预处理简单,样品需要量少,不需水解及衍生化,是临床常规检测的理想选择方法。其中依维莫司和西罗莫司等药物在人体中参考范围较低,检测信号低,部分文献采取简单的有机溶剂蛋白沉淀法,部分文献报道采取萃取方法,操作方法复杂费时。

血液样本成分复杂,含有大量的内源性大分子,使得分析结果易受基质效应的影响,因此在分析前需要对样本进行适当地预处理,将待测组分从生物样本基质中分离出来,以降低基质效应的影响。

简单的有机溶剂蛋白沉淀并不能完全去除杂质,且长期使用有机溶剂有一定毒性,易对操作人员和环境造成不可逆性损害,且有机溶剂的使用、回收和存储都比较麻烦,增加了检测成本;在进行定量分析时,杂质的存在严重影响检测结果的准确性。而过于复杂的提取方法如液相、固相萃取技术操作繁琐,且检测成本过高,不适合市场化大规模推广。因此样本提取技术就成为提高分析测定效率、改善和优化检测分析的重要环节。

发明内容

为了改善现有技术的不足,本发明提供了一种检测全血中免疫抑制剂药物的方法,解决了现有或常规方法采用有机溶剂蛋白沉淀提取药物在上机检测过程中对人员和环境产生危害、储存和回收成本高,以及提取药物信号和灵敏度低的问题,尤其对免疫抑制剂药物中的依维莫司和西罗莫司信号低达不到检测要求的问题,并且本发明的方法线性良好可行性高。

具体地,本发明提供了下述的技术特征,以下技术特征的一个或多个的结合构成本发明的技术方案。

在本发明的第一方面,本发明提供了一种检测全血中免疫抑制剂药物的方法,所述免疫抑制药物为依维莫司和西罗莫司,其中,所述方法包括对全血样品进行提取后采用HPLC-MS法检测分析,其中,提取液为三氟醋酸和氟化铵的甲酸溶液。

在本发明的实施方式中,本发明的提取液不会使样品立刻沉淀为一团,而是呈现出蓬松絮状、利于涡旋混匀,而且缩短涡旋混匀时间,使得提取更为充分,能够有效去除杂质,降低基质效应,增强待测物质的离子化效率,有效提高依维莫司和西罗莫司的信号。尤其是,经过优化,发明人发现提取液中三氟醋酸体积分数为0.01-0.05%,氟化铵的浓度为0.1-0.5mM,三氟醋酸体积分数优选为0.025%,氟化铵的浓度优选为0.4mM时效果较优,在本发明的一些实施方式中,相较于常规的提取方法,比如加入乙腈/硫酸锌沉淀剂,使用本发明的提取液可使得分析物西罗莫司的峰面积至少提升5.9倍,依维莫司的峰面积至少提升6.5倍。

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