[发明专利]一种产细菌素菌株的分离筛选和检测鉴定方法

说明书

本发明公开了一种产细菌素菌株的分离筛选和检测鉴定方法，包括以下操作步骤：产细菌素菌株的发酵肉样品的筛选：发酵肉制品是产细菌素菌株的重要来源之一，在无菌环境下，将肉制品样品切碎并置于绞肉机中绞碎，取样品加到无菌生理盐水的三角瓶中，充分震荡，静置后取悬液加到MRS液体培养基中。本发明所述的一种产细菌素菌株的分离筛选和检测鉴定方法，通过管碟法对采集的样品进行抑菌实验的检测，将此样品作为产细菌素菌株筛选以及关于细菌素后续研究的对象展开后续实验，从宏观方面来筛选，即首先筛选含有产细菌素乳酸菌的样品，再分离产细菌素的菌株，这样有目的性的分离筛选将提高效率，缩短菌株筛选的周期，带来更好的使用前景。

技术领域

本发明涉及产细菌素菌株鉴定领域，特别涉及一种产细菌素菌株的分离筛选和检测鉴定方法。

背景技术

产细菌素的菌株主要存在于发酵肉制品、乳制品等多种食品中。其中，发酵肉制品是产细菌素菌株的重要来源之一。该细菌素普遍具有安全性高、抑菌专一性强、pH稳定性和热稳定性高等优势，随着科技的不断发展，人们对于产细菌素菌株的分离筛选和检测鉴定方法要求也越来越高。

现有的产细菌素菌株的分离筛选和检测鉴定方法在使用时存在一定的弊端，传统产细菌素乳酸菌的筛选都是先从样品中筛选得到乳酸菌，再通过检测乳酸菌的发酵上清的抑菌活性来判断是否具有产细菌素的能力，降低工作效率，不利于人们的使用，给人们的使用过程带来了一定的不利影响，为此，我们提出一种产细菌素菌株的分离筛选和检测鉴定方法。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种产细菌素菌株的分离筛选和检测鉴定方法，通过管碟法对采集的样品进行抑菌实验的检测，将此样品作为产细菌素菌株筛选以及关于细菌素后续研究的对象展开后续实验，从宏观方面来筛选，即首先筛选含有产细菌素乳酸菌的样品，再分离产细菌素的菌株，这样有目的性的分离筛选将提高效率，缩短菌株筛选的周期，可以有效解决背景技术中的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种产细菌素菌株的分离筛选和检测鉴定方法，包括以下操作步骤：

S1：产细菌素菌株的发酵肉样品的筛选：发酵肉制品是产细菌素菌株的重要来源之一，在无菌环境下，将肉制品样品切碎并置于绞肉机中绞碎，取样品加到无菌生理盐水的三角瓶中，充分震荡，静置后取悬液加到MRS液体培养基中，置于恒温培养箱中，将培养好的菌液离心去沉淀，用L-1NaOH溶液将上清调至pH 6.0左右，用管碟法抑菌实验检验上清有否有抑菌效果；

S2：产细菌素菌株的样品中乳酸菌的分离纯化：在无菌环境下，将含产细菌素菌株的肉制品切碎并置于绞肉机中绞碎，取样品加到含有无菌生理盐水的三角瓶中，充分震荡，静置后即为YS01的悬液，另取装有9mL无菌水试管5支，吸取已稀释成YS01的悬液1mL加入无菌生理水的试管中，并震荡使之充分混匀，即成10-2稀释液，同法依次10倍连续稀释至10-4、10-5、10-6、10-7，取各个梯度的稀释液1mL至无菌平皿中，取已熔化的MRS固体培养基倒入平皿中，凝固后，倒置恒温培养，平板培养后，根据菌落形态、大小、颜色、培养基中生长位置，表面、内部、及底部，用接种环挑取不同表观特征菌落接种于MRS液体培养基中，置于恒温培养箱中培养，将培养好的菌株以10倍系列梯度稀释，选择合适的稀释度，取1mL菌液加入平皿中，用含有碳酸钙的MRS培养基倒平板，凝固后，倒置恒温培养，挑取具有溶钙圈的菌落进行接种培养，并用革兰氏染色进行镜检，记录存档，用甘油脱脂乳将纯化好的乳酸菌保藏于-20℃，以待后续实验所用；

S3：产细菌素乳酸菌的初筛：将S2步骤中分离出来的乳酸菌菌株进行活化，按1％的接种量将其接种于MRS液体培养基中，于37℃恒温培养箱中培养12-16h，再以同样的方法活化第二代，之后接种第三代并于37℃培养箱中培养24h，将培养好的菌液进行离心，并去上菌体沉淀，用L-1NaOH溶液将上清调至pH6.0左右，用S1步骤中所述管碟法检测乳酸菌株的发酵上清是否具有抑菌活性；