[发明专利]一种基于可溶性疏水载体抗菌肽Oreoch-2的液相合成方法

说明书

本发明具体涉及一种基于可溶性疏水载体抗菌肽Oreoch‑2的液相合成方法。现有抗菌肽Oreoch‑2合成以固相合成方法为主，制备工艺较为繁琐、并且后处理困难。为了克服上述上述问题，本发明提供了一种基于可溶性疏水载体辅助的液相制备抗菌肽Oreoch‑2的方法，将抗菌肽Oreoch‑2划分为若干片段，通过亲脂疏水性载体进行逐个氨基酸偶联合成片段，依次连接所述片段、脱除保护基及tag载体得到所述抗菌肽Oreoch‑2。该合成方法不受规模的限制，反应中可以通过TLC或液相法监测反应是否完全进行，有效避免了缺失或增添单个氨基酸残基杂质的产生，非常有效地降低了纯化难度并提高了原料的利用率。

技术领域

本发明属于抗菌肽Oreoch-2的合成技术领域，具体涉及一种基于可溶性疏水载体抗菌肽Oreoch-2的液相合成方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

细菌感染对人体健康有严重威胁。在中国每年至少有300万人受到感染，直接导致约33000人死亡。近年来，由于传统抗生素的滥用以及多重耐药细菌进化速度加快使得许多细菌产生耐药性。加之由于商业利益等原因，相比抗菌药物的研发速度，细菌的抗药性则以惊人的速度发展。因此，迫切需要一种新型抗菌药物来已对耐药菌、特别是多药耐药菌的挑战。

抗菌肽作为天然免疫系统的重要组成部分，在过去的二十年里引起了众多研究者的广泛关注，它凭借其抗菌谱广、作用迅速、热稳定性好、不易产生耐药性等优点，已逐步发展成为生物医学、兽医学相关方面的研究热点。抗菌肽独特的杀菌机制能够完美避开大多数细菌的耐药途径，有望成为新一代的高效抑菌药物。Oreoch-2是从罗非鱼鳃中分离出来的一种抗菌肽样转录物，它具有富含Arg的尾巴，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌等革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有良好的抗菌活性。基于其体外和体内功效，它还能抑制多药耐药性胃病菌幽门螺杆菌的生长，是良好的潜在抗菌药物。

抗菌肽Oreoch-2是由25个天然氨基酸残基组成的直链肽，其具体结构以及氨基酸序列如下式所示：

H-Phe-Ile-His-His-Ile-Ile-Gly-Gly-Leu-Phe-Ser-Ala-Gly-Lys-Ala-Ile-His-Arg-Leu-Ile-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-OH

针对抗菌肽Oreoch-2的合成，在相关文献中有一种方法是使用巴斯德毕赤酵母GS115进行表达。它首先将抗菌肽Oreoch-2的序列克隆到pPIC9的载体中，然后整合到巴斯德毕赤酵母的基因组中进行表达。除此之外，就是使用固相合成法来制备Oreoch-2。众所周知，固相合成法存在一些缺点：①它所涉及的反应为非均相反应，反应时间长且反应不完全；投料过量过多，多余的原料不能每一步都除掉，造成原料的浪费以及容易出现副反应。②由于固相合成法受固相树脂载体取代值的限制，总收率较低；且中间产生的缺失或增添单个氨基酸残基的副产物较多，这使得杂质性质与产物接近，难以纯化。因此，固相合成法原料成本较高而产率和纯度较低，纯化难度很大，对于中等长度的多肽来说不是一个很好的选择。

发明内容

针对上述研究现状，本发明目的在于规避一般固相合成法高成本低产出的缺点，基于可溶性疏水载体标记的液相多肽合成法，提供一种高效且低成本的液相制备抗菌肽Oreoch-2的方法。

基于上述技术目的，本发明提供了一种基于可溶性疏水载体抗菌肽Oreoch-2的液相合成方法，所述合成方法包括：将抗菌肽Oreoch-2划分为若干片段，通过可溶性疏水载体标记的液相制备法合成每个片段，再依次偶联上述片段得到所述抗菌肽Oreoch-2。