[发明专利]一种高通量合成单克隆抗体稳转表达细胞株的方法

权利要求书

1.一种高通量合成单克隆抗体稳转表达细胞株的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.制备目标抗原并采用目标抗原对动物进行免疫；

S2.免疫完成后取动物脾脏，采用流式细胞仪筛选出记忆B细胞及浆细胞，制成单细胞悬液；

S3.将单细胞的mRNA进行扩增逆转录合成cDNA，扩增抗体重链和轻链的可变区，分别连接至载体；

S4.进行细胞转染，即得到单克隆抗体稳转表达细胞株。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述的目标抗原为人IL6、IL2、CD3、CD4或CD8蛋白中的任意一种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述的目标抗原为人IL6或IL2蛋白；所述的人IL6蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述的人IL2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述的动物为大鼠、小鼠、兔子、羊和/或猴子中的任意一种或多种。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的动物为大鼠、小鼠和兔子。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中是利用抗CD8、CD4、F4/80、Gr1、CD38、B220、IgM、IgG1、PE-antigen的抗体进行细胞表面抗体标记，通过流式细胞仪筛选出记忆B细胞及浆细胞。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S3中所述的抗体重链和轻链的可变区的核苷酸序列为经过PCR Mix I引物扩增的序列片段。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4中所述的细胞转染，是对CHO细胞进行转染。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4中进行细胞转染后，进行稳转细胞株的筛选，以获得高表达单克隆抗体的细胞株。

10.权利要求1-9任一项所述的方法制备得到的细胞株在制备免疫诊断制剂中的应用。