[发明专利]一种表达单元、重组慢病毒表达载体、重组慢病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种表达单元，其特征在于，所述表达单元包括启动子和外源基因；所述启动子为人源PIRT基因启动子或RFT-I启动子。

2.根据权利要求1所述的表达单元，其特征在于，所述外源基因为肉毒素蛋白酶基因或破伤风毒素蛋白酶基因。

3.根据权利要求1所述的表达单元，其特征在于，所述人源PIRT基因启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述RFT-I启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种重组慢病毒表达载体，其特征在于，所述重组慢病毒表达载体以慢病毒骨架载体SYN-DsRed-SYN-GFP为基础，在多克隆位点插入权利要求1所述的表达单元。

5.根据权利要求4所述的重组慢病毒表达载体，其特征在于，所述多克隆位点为NsiI和EcoRI的酶切位点。

6.权利要求4或5所述的重组慢病毒表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将人源PIRT基因启动子插入到SYN-DsRed-SYN-GFP慢病毒骨架载体的Nsi I与Nhe I酶切位点之间，得到SYN-DsRed-hPIRT-GFP载体；

2)将外源基因插入到SYN-DsRed-hPIRT-GFP载体的Nhe I和EcoR I酶切位点之间，即得含hPIRT-外源基因表达单元的重组慢病毒表达载体；

3)将RFT-I启动子插入到所述(2)重组慢病毒表达载体的Nsi I与Nhe I酶切位点之间，即得含RFT-I-外源基因表达单元的重组慢病毒表达载体。

7.包括权利要求4或5所述的重组慢病毒表达载体的重组慢病毒。

8.权利要求7所述的重组慢病毒的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

将权利要求4或5所述的重组慢病毒表达载体与慢病毒包膜载体及包装载体共转染细胞系即得。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述慢病毒包膜载体为pMD2.G；所述包装载体为psPAX2；所述细胞系为293T细胞。

10.权利要求1-3任意一项所述的表达单元、权利要求4-5任意一项所述的重组慢病毒表达载体或权利要求7所述的重组慢病毒在制备治疗慢性疼痛药物中的应用。