[发明专利]一种高效提取人大量粪便样本DNA提取方法及试剂盒

权利要求书

1.一种人类大量粪便样本DNA高效提取试剂盒，其特征在于：由以下四种溶液组成：

(1) 粪便细胞裂解液：为醋酸钠、硫酸铵、CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)和NaCl的混合溶液，混合溶液中醋酸钠的浓度为50-500mM之间，优选浓度为200 mM；CTAB的质量浓度为0.1-1%之间，优选质量浓度为0.2-0.5%之间； NaCl的浓度为20-600mM之间，优选浓度为50-200mM之间；硫酸铵的浓度为200-950mM之间，优选浓度为350-450mM之间；

(2) 杂质沉淀剂：为曲拉通X-100和硫酸氢铵的混合溶液，其中，曲拉通X-100体积比浓度为0.5-3%之间，优选体积比浓度为1-2%之间；硫酸氢铵的浓度为500-1500mM之间，优选浓度为800-1000mM之间；

(3) DNA结合液：为NaCl、乙酸钾和异丙醇的混合溶液，其中，NaCl的浓度为500mM-2M之间，优选浓度为1-2M之间；异丙醇体积浓度为10-30%之间，优选浓度为15-20%之间，乙酸钾的浓度为500mM-2M之间，优选浓度为1-1.5M之间，用醋酸调溶液的pH值为4-5之间，优选PH为4.5；

(4) 蛋白杂质去除液：为硫酸铵和盐酸胍的混合溶液，其中，硫酸铵的浓度为300mM-2M之间，优选浓度为205-450mM之间；盐酸胍的浓度为2M-4M之间，优选浓度为2.5M；

(5) DNA漂洗液：为NaCl和乙醇的混合物，其中，乙醇的浓度为65-85 vt %之间，优选浓度为75-80 vt %之间；NaCl的浓度为20-200mM之间，优选浓度为50-100mM之间；

(6) DNA洗脱液：5mM的Tris-HCl缓冲液，pH值8.0-8.5。

2.一种通过权利要求1所述的人类粪便DNA提取的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1) 称取人粪便样本2-5g于15-50 mL EP管中，加入5mL粪便细胞裂解液，在漩涡振荡器上振荡2min；

(2) 70℃孵育10 min，孵育期间震荡2-3次；

(3) 12,000 rpm离心3 min；

取上清液至新的15-50 mL EP管中；

(4) 将步骤(3)获得的上清液中加入500µL杂质沉淀剂，在漩涡振荡器上振荡2min；12,000rpm离心3min；

(5) 将步骤(4) 获得的上清液转移4mL到新的EP管中，加入4mL DNA结合液和2mL 乙醇和100µL 磁珠溶液，振荡混匀，室温放置5min；

(6) 将(5)中的EP管置于磁力架上，放置1min，等磁珠全部吸附后，用移液枪将液体吸取弃去，将EP管取下磁力架，加入2mL蛋白杂质去除液，涡旋振荡混匀；

(7) 将(6)中的EP管置于磁力架上，放置1min，等磁珠全部吸附后，用移液枪将液体吸取弃去，将EP管取下磁力架，加入2mL DNA漂洗液，涡旋振荡混匀；

(8) 将(7)中的EP管置于磁力架上，放置1min，等磁珠全部吸附后，用移液枪将液体吸取弃去，将EP管取下磁力架，加入500 µL DNA漂洗液，涡旋振荡混匀；

(9) 将(8)中的溶液转移到1.5-2mL EP管，置于磁力架上，放置1min，等磁珠全部吸附后，用移液枪将液体吸取弃去，磁力架上放置5min；将EP管取下磁力架，加入200μL DNA洗脱液，静置2min，涡旋振荡混匀；

(10) 将(9)中的EP管置于磁力架上，放置1min，等磁珠全部吸附后，用移液枪吸取全部上清，磁珠弃去。