[发明专利]一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒

说明书

本发明提供了一种氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒，采用双抗体夹心法检测氨基末端脑尿钠肽的含量；采用本发明的氨基末端脑尿钠肽检测方法和试剂盒，可以有效提高检测的特异性和/或检出率。

技术领域

本发明涉及蛋白检测领域。具体而言，本发明涉及氨基末端脑尿钠肽的检测方法和试剂盒。

背景技术

心力衰竭(心衰)是各种心脏疾病的严重和终末阶段，临床上主要表现为呼吸困难、乏力以及液体潴留等。据统计，我国目前心衰患病估计已达1.3％左右，现症患者约1000万，中国已成为世界上拥有最大心衰病患群体的国家。由于心血管疾病的可预防控制性，早期诊断至关重要。

血清标志物检测是临床上心衰早期诊断和预后判断的重要手段之一。其中包括脑尿钠肽(BNP)和氨基末端脑尿钠肽(NT-proBNP)，是国内外(ECS/ACC/AHA/HFSA/CSC)心力衰竭指南均推荐的心力衰竭首选血清标志物。

相比于BNP，NT-proBNP的半衰期更长、稳定性更好，因此NT-proBNP在检测早期或轻度心衰时的敏感度更高，更适用于临床应用。

发明内容

发明人经过大量理论研究和实验摸索，充分考虑氨基末端脑尿钠肽的结构特性，对各种待测NT-proBNP抗原区间和检测抗体进行分析研究，获得了能够用于氨基末端脑尿钠肽检测的氨基末端脑尿钠肽抗原区域组合。

在一些实施方案中，本发明可以包括下述一项或多项：

1.一种氨基末端脑尿钠肽检测试剂盒，其包括用于检测氨基末端脑尿钠肽的第一抗体和第二抗体，其中，第一抗体结合氨基末端脑尿钠肽的第27-31位氨基酸片段；第二片段结合氨基末端脑尿钠肽的第42-46位氨基酸片段。

2.项目1所述的试剂盒，第一抗体为标记抗体时第二抗体为包被抗体；或第二抗体为标记抗体时第一抗体为包被抗体。

3.项目1所述的试剂盒，进一步包括检测氨基末端脑尿钠肽的第三抗体，所述第三抗体结合氨基末端脑尿钠肽的第13-27位氨基酸片段；

例如用于配对的抗体分为第一组抗体和第二组抗体，其中第一组抗体和第二组抗体选自下组：

1)第一组抗体包括第一抗体，并且第二组抗体包括第二抗体和第三抗体；

2)第一组抗体包括第二抗体，并且第二组抗体包括第一抗体和第三抗体；

3)第一组抗体包括第三抗体，并且第二组抗体包括第一抗体和第二抗体。

4.项目1-3任一项所述的试剂盒，其中所述抗体的反应性为ELISA评价OD₄₀₅≥0.5。

5.项目1-4任一项所述的试剂盒，其中所述标记抗体用可检测标记物和/或结合配偶体标记，可检测标记物例如金属粒子，荧光标记，发色团标记，电子致密标记，化学发光标记，放射性标记，或酶标记；例如可以是罗丹明，荧光素，荧光微球，胶体金，吖啶酯，荧光素酶，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记；结合配偶体例如是生物素/抗生物素蛋白，生物素/链霉抗生物素蛋白；例如标记抗体通过结合配偶体与可检测标记物进行标记。

6.项目1-5任一项所述的试剂盒，其中所述包被抗体连接至固相和/或结合配偶体，固相例如是磁性颗粒，胶乳粒子、微量滴定板、硝酸纤维素膜或微流控芯片；结合配偶体例如是生物素/抗生物素蛋白，生物素/链霉抗生物素蛋白；例如包被抗体通过结合配偶体与固相进行连接。

7.检测氨基末端脑尿钠肽的抗体组合，包括第一抗体和第二抗体；任选地，还包括第三抗体；其中第一抗体、第二抗体、第三抗体根据项目1-6中任一项所定义。

8.项目7所述的抗体组合在制备检测氨基末端脑尿钠肽的试剂盒中的用途。