[发明专利]一种检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法与应用。本发明的化学发光免疫分析试剂盒，包括：微孔板、CD47标准品梯度溶液、样品稀释液、辣根过氧化物酶标记的CD47单克隆抗体2、酶标稀释液、20×浓缩洗涤液、发光液A、发光液B；本发明的检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒，在发光液B中加入了增强剂HIOP，HIOP是一种对位具有活性取代基的酚类化合物4‑羟基‑4'‑碘联苯，与传统增强剂相比，增强效果较好，检测限降低，线性范围变宽，显著提高了检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒的灵敏性、精密性及检测速度。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂盒技术领域，具体涉及一种检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法与应用。

背景技术

CD47，又称为整合素相关蛋白(Integrin-associated Protein，IAP)，是一种广泛表达于多种细胞表面的高糖基化跨膜蛋白。CD47分子结构属于免疫球蛋白超家族跨膜糖蛋白，包括1个胞外Ig型可变结构域、3～5个疏水跨膜片段和1个羧基端胞质尾区等，其功能与整合素相关。CD47广泛表达于人体的不同组织细胞表面，如红细胞、淋巴细胞、肝细胞、胎盘以及肿瘤细胞表面等。信号调节蛋白α(SIRPα)是其特异性配体，主要表达于巨噬细胞和树突状细胞等吞噬性细胞表面。CD47与其配体SIRPα可形成信号复合体，可调控免疫应答及介导双向信号调节作用，参与多种生理功能，如：巨噬细胞吞噬、中性粒细胞趋化，神经系统发育等。

CD47与巨噬细胞表面的SIRPα受体结合，可激活酪氨酸磷酸化酶，抑制肌球蛋白在巨噬细胞突出下聚集，从而避免巨噬细胞对靶细胞的吞噬功能。如：正常生理状态下，衰老或受损的红细胞会CD47表达缺失，解除巨噬细胞吞噬的负调控，被机体新陈代谢。研究表明，多种肿瘤，包括淋巴瘤和白血病、肉瘤以及几乎所有实体瘤与其对应正常细胞不同，能高水平表达CD47分子，通过与巨噬细胞表面SIRPα配体结合，介导“Don’t eat me”信号导致肿瘤细胞的固有免疫逃逸，其高水平表达既能促进肿瘤细胞的生长又能促进肿瘤细胞的转移。研究发现CD47在肿瘤细胞平均表达量高于正常细胞水平2-10倍左右。另有研究表明膀胱癌患者尿液中CD47表达水平高于正常组；胃癌、乳腺癌患者血清中CD47均异常表达；肺癌、幽门螺旋杆菌感染患者血清中CD47浓度明显高于健康人群，经过药物治疗后，血清CD47浓度显著下降，故CD47可作为诊断肿瘤及判定预后的较可靠指标。因此，开发一种可以检测人体CD47含量的检测试剂盒有利于临床上肿瘤患者的检测、筛查与预后监测。

现有技术中，国外相关化学发光免疫试剂盒已有相应应用，但检索国家药品监督管理局网站，国产试剂和进口试剂均未搜索到CD47检测试剂盒注册文号。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法与应用，以克服现有化学发光免疫试剂盒不稳定和灵敏度较低的缺陷。

本发明的技术方案如下：

一种检测CD47的化学发光免疫分析试剂盒，包括：微孔板、CD47标准品梯度溶液、样品稀释液、辣根过氧化物酶标记的CD47单克隆抗体2、酶标稀释液、20×浓缩洗涤液、发光液A、发光液B。

进一步优选的，所述微孔板为96或48孔微孔板，且其各孔包被有CD47单克隆抗体1(Mab1)。

进一步优选的，所述CD47标准品梯度溶液包括浓度梯度为560ng/mL、280ng/mL、140ng/mL、70ng/mL、35ng/mL、0ng/mL的6个CD47标准品溶液，所述CD47标准品梯度溶液以标准品缓冲液配制得到，所述标准品缓冲液为含5wt％牛血清白蛋白、0.85wt％氯化钠的pH＝7.0的1.0mmol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠的缓冲液。