[发明专利]一种梅毒螺旋体重组抗原、制备及应用

权利要求书

1.一种梅毒螺旋体重组抗原，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1所述的梅毒螺旋体重组抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)参考GenBank数据库WP_010881883.1氨基酸序列，去除信号肽1-22aa，通过密码子优化得到梅毒螺旋体抗原TP17，对应的核苷酸序列为SEQ ID NO.7所示；

(2)在TP17基础上进行氨基酸突变：将N端第20位半胱氨酸和第36位半胱氨酸突变丝氨酸，即：C20S、C36S；目的基因产物为TP17S，对应的核苷酸序列为SEQ ID NO.5所示；

(3)以TP17S为模板，分别设计扩增两段TP17S的上下游引物，在引物前添加酶切位点及保护碱基，同时在扩增第二段TP17S下游引物中引入组氨酸标签，引物P1、P2、P6、P7的核苷酸序列分别对应SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14；

以TP17S为模板，P1为上游引物、P6为下游引物扩增TP34S第一段目的基因序列TP17S，以P7为上游引物、P2为下游引物扩增第二段目的基因序列TP17S，扩增产物经回收后，分别进行双酶切，酶切产物回收后进行连接，将连接后的产物TP34S连接到BamH I和Xho I酶切之后的质粒载体pGEX-4T-1上，形成重组质粒；

(4)将步骤(3)中的重组质粒转入宿主细胞，形成转化子细胞；

(5)在适合的条件下，培养步骤(4)中的转化子细胞，表达该重组抗原；

(6)分离纯化出重组抗原。

3.一种用于检测梅毒的金标层析试纸条，其特征在于，所述试纸条的包被抗原为权利要求1所述的梅毒螺旋体重组抗原。