[发明专利]去免疫原人脐带内膜-纤维蛋白复合皮肤支架的制备方法

说明书

本发明公开了去免疫原人脐带内膜‑纤维蛋白复合皮肤支架的制备方法，属于人造皮肤技术领域，包括以下步骤：取无病毒及细菌感染的胎盘，剪断脐带，以无菌生理盐水，空气，氮气等无创扩张法，在无菌条件下从脐带基底层上钝性剥离并获得脐带内膜，去除脐带内膜表面的杂质；将剥离后的脐带内膜用生理盐水清洗后置于含抗生素的自备培养液中浸泡消毒，然后将侵泡液过滤分装后置于‑80℃保存备用；脐带内膜用不同浓度的有机溶液‑生理盐水进行脱水处理。本发明由于贴附在伤口上的皮肤支架具有活性，使皮肤支架在贴合在伤口患处一段时间内能够与人体皮肤成为一体，使其可伤口处进行永久性的修复。

技术领域

本发明涉及人造皮肤技术领域，具体的涉及去免疫原人脐带内膜-纤维蛋白复合皮肤支架。

背景技术

基质层脐带内膜为单层上皮细胞互相连接构成的薄膜基质。随着胚胎的生长发育，脐带内膜与脐带基质层贴附生长，富有韧性。脐带内膜是脐带最内层其光滑，无血管、无神经及淋巴，具有一定的弹性，厚约0.1-0.2mm，脐带内膜含有胶元、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白等成份，正是这些成份使脐带内膜可以充当“移植的基底膜”而发挥新的健康合适的基质作用来促进上皮化。具有促进上皮粘附生长及增殖，减轻炎症，抑制新生血管形成，减少瘢痕增生，抗粘连等特性而把其应用于严重急性期或陈旧性皮表烧伤，皮肤缺损创面，提供一个含基底和基质成份的胶质支架，使增殖的上皮细胞可在其上扩展及移行；并且，脐带内膜有助于干细胞的增殖并提供一个适合其生长的微环境，脐带内膜作为新型的生物材料，取得了神奇的效果，(大小动物实验结果证明疤痕小，皮毛生长)而且它来源广泛，价格低廉，取材和保存简便，手术操作简单而且几乎不发生免疫排斥反应，十分适宜在基层医院开展。

现有对人体患处进行植皮，多数的采用自体皮肤进行移植，但是当伤口面积较大时，自体皮肤的移至是有限的，从而不能满足医用需求，且由于自体皮肤的移植是需要通过手术才能实现的，这将增大患者在治疗期间的痛苦，不利于患者伤口的愈合，另外虽然现在市场上已经出现并用于临床的皮肤的产品，但是由于其不具有延展性，导致人工合成的皮肤支架在裁切尺寸固定后，只能适用于一定尺寸的患处的贴敷，这将影响复合后皮肤支架的适用范围。

发明内容

1.要解决的技术问题

本发明的目的在于提供去免疫原人脐带内膜-纤维蛋白复合皮肤支架的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

2.技术方案

为解决上述问题，本发明采取如下技术方案：

去免疫原人脐带内膜-纤维蛋白复合皮肤支架的制备方法，包括包括以下步骤：

1)取无病毒及细菌感染的胎盘，剪断脐带，以无菌生理盐水，空气，氮气等无创扩张法，在无菌条件下从脐带基底层上钝性剥离并获得脐带内膜，去除脐带内膜表面的杂质；

2)将剥离后的脐带内膜用含0.1-1mol/L NaOH的生理盐水清洗3次后，置于抗生素的自备培养液中浸泡消毒，然后将侵泡液过滤分装后置于-80℃保存备用；

3)脐带内膜转入0.5-3mol/L NaOH溶液中浸泡24-72h进行灭菌处理，随后用不同浓度的有机溶液-生理盐水进行脱水处理；

4)将脱水后的脐带内膜置于无菌超净工作台内，平铺于无菌细胞培养皿底部，静置；

5)将含有0.1-1000U/ml人凝血酶和2-20％人血清白蛋白的溶液均匀涂抹在去免疫原处理后的脐带内膜基质表面；

6)将含有2.0-5.0mg/ml等体积纤维蛋白原的溶液均匀涂抹于上述处理后的脐带内膜基质表面；

7)加培养皿盖后，移入20-45℃恒温干燥箱内，静置0.5-24h后获得干燥的脐带内膜-纤维蛋白复合皮肤支架；

8)在无菌室内可按需求裁剪成不同规格脐带内膜-纤维蛋白复合皮肤支架；