[发明专利]一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法

说明书

本发明公开了一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法，包括以下步骤：步骤S1、准备实验生物材料：选取13只6‑8周龄的C57BL/6J雄性实验小鼠，并对所述实验小鼠进行生物预处理获得第一备用小鼠；步骤S2、构建慢性肾脏病小鼠模型：实验第0周第0天，对第一备用小鼠进行手术结扎左肾上极的动脉供血，同时切除右肾，造成慢性肾脏疾病获得第二备用小鼠。本发明在患有慢性肾脏病和动静脉瘘的小鼠建立了静脉狭窄的PTA模型，经PTA处理的血管管腔面积增大，WSS增大。血管重构、组织缺氧、增殖和细胞凋亡等组织标志物的改变可能对未来药物和设备开发的设计有影响。

技术领域

本发明涉及医学模型技术领域，具体涉及一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法。

背景技术

终末期肾病患者需要血液透析，动静脉瘘(AVF)是血液透析的首选血管通路，而静脉狭窄是AVF失败的主要原因之一。采用经皮腔内血管成形术(PTA)治疗，对血管进行组织学表征，更好地了解这些机制可能有助于开发新的治疗干预措施，以防止再狭窄。

组织学上，静脉新生内膜增生(VNH)是PTA失败的原因。不幸的是，目前对VNH形成的分子机制缺乏了解。为了了解其机制，动物模型已经被创建。利用大型动物模型，可以检测介入装置的疗效；然而，这些模型也有局限性，通常需要更长的时间来诱导明显的狭窄，而且这些模型通常具有正常的肾功能，模型产生的实验指标精确度低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法，以解决现有技术中需要更长的时间来诱导明显的狭窄和再狭窄，而且这些模型通常具有正常的肾功能，模型产生的实验指标精确度低的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明具体提供下述技术方案：

一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法，包括以下步骤：

步骤S1、准备实验生物材料：选取13只6-8周龄的C57BL/6J雄性实验小鼠，并对所述实验小鼠进行生物预处理获得第一备用小鼠；

步骤S2、构建慢性肾脏病小鼠模型：实验第0周第0天，对第一备用小鼠进行手术结扎左肾上极的动脉供血，同时切除右肾，造成慢性肾脏疾病获得第二备用小鼠；

步骤S3、构建动静脉瘘小鼠模型：实验第4周第0天，对第二备用小鼠进行右侧颈外静脉(REJV)端与左侧颈总动脉(LCCA)侧吻合操作形成动静脉瘘(AVF)获得第三备用小鼠；

步骤S4、构建PTA小鼠模型和AVF小鼠模型对照组：实验第6周第0天，对第三备用小鼠进行麻醉，进行PTA和假手术获得PTA组第四备用小鼠和AVF组第四备用小鼠，同时利用术中测量的速度和直径数据计算不同时间点的后壁剪应力(WSS)；

步骤S5、实验指标分析统计：实验第8周第0天，分别对PTA组第四备用小鼠和AVF组第四备用小鼠颈静脉标本解剖，依次进行免疫组化分析评估细胞变化、TUNEL染色评估细胞凋亡、Picrosirius红染色评估胶原蛋白、Verhoeff-Van Gieson(VVG)染色评估流出静脉上的弹性纤维、苏木精和伊红染色(HE)评估静脉重构，获得PTA组第四备用小鼠和AVF组第四备用小鼠的实验指标；

步骤S6、小鼠模型评价：通过PTA组第四备用小鼠和AVF组第四备用小鼠的实验指标比照评价PTA小鼠模型质量。

作为本发明的一种优选方案，所述步骤S1中，所述实验小鼠进行生物预处理的具体方式为：

所述实验小鼠均使用氯胺酮(120mg/kg)和甲苯噻嗪(10mg/kg)进行麻醉，并必要时使用氯胺酮(40mg/kg)和甲苯噻嗪(3mg/kg)追加麻醉，在所述步骤S2、步骤S3和步骤S4中的第一备用小鼠、第二备用小鼠和第三备用小鼠术前均给予1剂丁丙诺啡(0.05-0.1mg/kg全身皮下注射)缓解疼痛，术后，皮下注射0.5mL生理盐水，并静置在暖板上进行麻醉复苏。