[发明专利]一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法

权利要求书

1.一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1、准备实验生物材料：选取13只6-8周龄的C57BL/6J雄性实验小鼠，并对所述实验小鼠进行生物预处理获得第一备用小鼠；

步骤S2、构建慢性肾脏病小鼠模型：实验第0周第0天，对第一备用小鼠进行手术结扎左肾上极的动脉供血，同时切除右肾，造成慢性肾脏疾病获得第二备用小鼠；

步骤S3、构建动静脉瘘小鼠模型：实验第4周第0天，对第二备用小鼠进行右侧颈外静脉(REJV)端与左侧颈总动脉(LCCA)侧吻合操作形成动静脉瘘(AVF)获得第三备用小鼠；

步骤S4、构建PTA小鼠模型和AVF小鼠模型对照组：实验第6周第0天，对第三备用小鼠进行麻醉，进行PTA和假手术获得PTA组第四备用小鼠和AVF组第四备用小鼠，同时利用术中测量的速度和直径数据计算不同时间点的后壁剪应力(WSS)；

步骤S5、实验指标分析统计：实验第8周第0天，分别对PTA组第四备用小鼠和AVF组第四备用小鼠颈静脉标本解剖，依次进行免疫组化分析评估细胞变化、TUNEL染色评估细胞凋亡、Picrosirius红染色评估胶原蛋白、Verhoeff-Van Gieson(VVG)染色评估流出静脉上的弹性纤维、苏木精和伊红染色(HE)评估静脉重构，获得PTA组第四备用小鼠和AVF组第四备用小鼠的实验指标；

步骤S6、小鼠模型评价：通过PTA组第四备用小鼠和AVF组第四备用小鼠的实验指标比照评价PTA小鼠模型质量。

2.根据权利要求1所述的一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法，其特征在于：所述步骤S1中，所述实验小鼠进行生物预处理的具体方式为：

所述实验小鼠均使用氯胺酮(120mg/kg)和甲苯噻嗪(10mg/kg)进行麻醉，并必要时使用氯胺酮(40mg/kg)和甲苯噻嗪(3mg/kg)追加麻醉，在所述步骤S2、步骤S3和步骤S4中的第一备用小鼠、第二备用小鼠和第三备用小鼠术前均给予1剂丁丙诺啡(0.05-0.1mg/kg全身皮下注射)缓解疼痛，术后，皮下注射0.5mL生理盐水，并静置在暖板上进行麻醉复苏。

3.根据权利要求2所述的一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法，其特征在于：所述步骤S3中，形成动静脉瘘(AVF)的具体方式：

使用解剖显微镜分离第二备用小鼠的REJV，将LCCA解剖至分叉处，夹紧近端和远端，并保持切口长度约为1mm，用1ml肝素化盐水(100u/mL)冲洗动脉管腔和REJV管腔，同时采用11-0尼龙缝线进行端侧吻合，再松开REJV和LCCA，通过静脉和动脉吻合构建AVF。

4.根据权利要求3所述的一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法，其特征在于：所述步骤S4中，进行PTA和假手术获得PTA组第四备用小鼠和AVF组第四备用小鼠的具体方式为：

进行PTA获得PTA组第四备用小鼠：在解剖手术显微镜下选取部分第三备用小鼠进行REJV和LCCA分离并夹紧，穿刺后用1ml肝素化盐水(100u/mL)冲洗AVF血管腔，并将直径1.2mm，长6mm的冠状动脉球囊导管推进至AVF吻合口附近并将球囊工作压力扩张至14大气压并维持30s，将球囊放气并取出，用1ml肝素化盐水(100u/mL)冲洗管腔，穿刺部位用11-0尼龙缝线缝合，松开REJV和LCCA，确保AVF通畅形成PTA组第四备用小鼠。

5.根据权利要求4所述的一种药物涂层球囊小鼠模型的构建及评价方法，其特征在于：所述步骤S4中，在第三备用小鼠的PTA和假手术过程中连续记录8个外周血流周期超声多普勒测量PTA组第四备用小鼠和AVF组第四备用小鼠颈静脉直径、AVF通畅率和血流速度以计算后壁剪应力(WSS)，所述WSS的计算公式为：

WSS＝4hV/r

式中，h为血液粘度；

V为血流速度(cm/s)；

r为半径(cm)。