[发明专利]柚籽多糖提取工艺

说明书

本发明公开了柚籽多糖提取工艺，包括：将柚子籽粒烘干后粉碎得到柚籽粉，柚籽粉经脱脂处理后采用水提结合酶法，同时辅以超声提取籽多糖，然后得到的粗多糖依次经除蛋白和脱盐处理，最后通过离子交换层析和分子筛层析得到纯化的柚籽多糖。本发明采用脱脂预处理+热水浸提+酶法提取+超声提取，极大地降低了柚籽多糖的提取时间和成本，提高了提取率。本发明将柚子籽粒作为新的多糖资源，具有广阔的利用前景，对于柚子籽粒的深加工以及柚子产业发展具有积极的推动作用。

技术领域

本发明涉及食品加工技术领域，具体地说，涉及一种柚籽多糖提取工艺。

背景技术

柚子籽重量约占单果的0.1％～4.0％，其中富含多种天然生物活性成分，如柚子油、黄酮、类柠檬苦素、诺米林等，另含脂肪油、无机盐、蛋白质、粗纤维、多糖以及一些微量元素等。柚籽中的活性成分如柠檬苦素类和黄酮类化合物，具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、昆虫拒食等作用，对医药临床、农业生产和农药领域都具有十分重要的意义。在日常生活中，柚子籽大都被丢弃，造成自然资源的浪费。迄今为止，柚子皮多糖已得到了较有效的开发和利用，而对于柚籽多糖的开发利用甚少。柚子籽多糖的提取工艺及其结构、理化性质和生物活性等方面的研究还存在着较多的空白。因此，加大对柚子籽多糖的研究力度，有利于提高柚子副产物的综合利用水平并为提升其加工附加值提供依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种柚籽多糖提取工艺。

为了实现本发明目的，本发明提供柚籽多糖提取工艺，包括：将柚子籽粒烘干后粉碎得到柚籽粉，柚籽粉经脱脂处理后采用水提结合酶法，同时辅以超声提取籽多糖，然后得到的粗多糖依次经除蛋白和脱盐处理，最后通过离子交换层析和分子筛层析得到纯化的柚籽多糖。

前述的工艺，采用有机溶剂浸提法对柚籽粉进行脱脂处理，所用有机溶剂可选自正己烷、石油醚、丙酮，优选正己烷。

优选地，浸提的温度为160℃。

前述的工艺，将经过脱脂处理后的柚籽粉干燥至恒重，粉碎过60目筛。

前述的工艺，酶法提取使用纤维素酶(柚籽种皮主要成分为纤维素，用纤维素酶可以有针对性地除去纤维素)，脱脂处理后的柚籽粉与纤维素酶的质量比为1∶10。

本发明使用的纤维素酶可来自微生物，如绿色木霉。

优选地，采用Sevag法去除粗多糖中的蛋白质。Sevag法是利用试剂中的氯仿使蛋白质变性沉淀下来，最后通过离心去除沉淀来将蛋白质去除，对多糖的结构不造成影响，且氯仿溶剂与多糖不相溶，容易去除。若采用其他脱蛋白方法，如蛋白酶法等，蛋白质的脱除效果不理想。例如蛋白酶法是利用酶的特异性将多糖中的蛋白质酶解成氨基酸或多肽，但容易造成酶解不彻底，且酶会残留在多糖中，造成纯化困难。

前述的工艺，除蛋白后的籽多糖溶液进行透析脱盐，所用透析液为去离子水，并采用真空冷冻干燥的方式对透析脱盐后的籽多糖溶液进行干燥。

优选地，真空冷冻干燥的条件为：-80℃干燥36h左右。

前述的工艺，采用阴离子交换柱进行离子交换层析，优选DEAE-Sepharose FastFlow柱，并使用不同浓度的氯化钠溶液进行梯度洗脱，并收集0.3M氯化钠溶液对应的洗脱液。阴离子交换柱的工作原理为：将带有负电荷的多糖吸附到柱子上，带有正电荷的多糖被洗脱下来，实现带正负电荷多糖的分离。

前述的工艺，采用葡聚糖凝胶柱进行分子筛层析，优选Sephadex G100柱。分子筛层析主要是对分子量为1000～100000Da的大分子物质进行大小分级，本发明柚籽多糖的分子量在1000～100000Da之间，故可以使用此填料进行分级。

在本发明的一个具体实施方式中，柚籽多糖提取工艺包括以下步骤：

1)样品制备：将柚子籽粒筛选除杂，于50℃烘干至恒重，然后粉碎过20目筛，得到柚籽粉；